3'-5'RACE, Anchored PCR, Rapid amplification of cDNA ends

[invitef6b1c123]

Bonjour a tous,

J'ai parcouru le forum en quete de solution mais je n'ai pas vraiment trouve chaussure a mon pied .

En fait, je n'ai pas vraiment compris le but d'une RACE (malgre les explications ici : http://forums.futura-sciences.com/bi...lications.html) car je voudrais savoir:

1- Les avantages, inconvenients de cette technique (par rapport a un sequencage par exemple).
2- A quoi cela sert-il de connaitre ces extremites?
3- Est-ce important de connaitre l'extremite 3' et/ou 5' lorsque l'on fait une librarie a partir de cDNA?
4- Comment design-t-on les primers si ces deux parties sont inconnues?

Beaucoup de questions pour une si petite technique!

Merci d'avance!
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[Yoyo]

Bonjour

Oui c'est important de connaitre les extrémités de l'ARNm ca permet de connaitre le démarrage de transcription et ou la terminaison se produit.
L'objectif est donc de faire une RT pcr et de voir ou la polymerase s'arrete car il n'y a plus de matrice (ARNm).
Pour pouvoir réaliser une RACE PCR il faut a minima connaitre la séquence codante de ton gene.

Yoyo

[invitef6b1c123]

Bonjour,

Merci de votre information. Je pense avoir compris maintenant. Du coup, cela n'apporte aucun avantage si on le compare a un sequencage (a part le fait que est moins cher)?

Merci encore

JB