Bonjour,
J'aimerai avoir votre aide en ce qui concerne l'analyse d'un principe actif dans le sang par HPLC, dans le cadre d'établir la biodisponibilité de ce derniers.
Est ce que qu'elle qu'un pourra me donner le protocole et les démarche a suivre ou m'orienter un peu ?
Merci
Bonjour,
Ce qui est certain c'est que dans un premier temps, il faudra éliminer tous les éléments figurés du sang(= les cellules) ainsi que la plupart des protéines(dont celles responsables de l'hémostase) et tu obtiendras ce qu'on appelle le sérum. Donc il faut passer le tube à la centrifugeuse. Une fois centrifuger dans les conditions adéquates, il faudra récupérer le surnageant.
Ensuite, vu qu'il reste encore quelques protéines(anticorps et cie) dans ton sérum en plus de ton médicament, il faudra passer par une étape d'extraction: extractions liquide-liquide ou liquide-solide(SPE). Le sérum est considéré comme un milieu aqueux. Pour l'extraction liquide-liquide, il faudra donc utiliser un solvant organique approprié non miscible à l'eau. Mettre en contact les 2 liquides, puis agiter pour faciliter le transfert du soluté à extraire dans le solvant d'extraction. Et enfin, séparer les 2 phases par décantation ou centrifugation.
Bref, c'est ultra simplifié, mais j'espère que je t'oriente déjà vers où chercher.
Dernière modification par Neon20 ; 05/07/2016 à 11h48.
Merci beaucoup
J'ajouterai également que pour l'extraction, l'extraction liquide-solide semble plus avantageuse que la liquide-liquide pour plusieurs raisons: on peut la coupler en ligne avec de la chromato, le choix de phases stationnaires est large et donc on arrive toujours à en trouver une qui correspond à notre soluté d'intérêt etc etc.
L'extraction liquide-solide est également plus utilisée que la liquide-liquide en pratique du fait de ses avantages.
Bonjour
Dans le cas du couplage avec l'hplc on utilise une colonne c18 greffé directement ?
Merci
Je dirais oui, mais il faudrait voir avec quelqu'un de plus spécialisé. Mais tu peux également chercher ce qui a été fait sur le sujet sur Pubmed: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?...LC+drug+plasmaDans le cas du couplage avec l'hplc on utilise une colonne c18 greffé directement ?
Je sais que les colonnes C8 ou C18 retiendront le médicament mais aussi les autres composés apolaires comme le cholestérol et les acides gras. Après, je ne sais pas s'il existe un moyen de se débarrasser des lipides. Tu arriveras certainement à distinguer ton composé des autres en connaissant son temps de rétention. Il faut savoir aussi que ton composé a pu également être métabolisé en une multitude d'autres substances lors de son séjour dans l'organisme donc au final, il faut s'attendre à voir plein de pics sur ton chromatogramme.
