Bonjour
Voila, je poste ce message car j'ai besoin d'un peu d'aide.
Je recherche actuellement à analyser un principe actif, le 8-methoxypsoralen dans un plasma sanguin (centré sur 120mg/l environs). Actuellement, je prépare mes échantillons en précipitant les protéines avec de l’éthanol (50°)pendant 1 heure et je le centrifuge à 3000trs/min pendant 10min.
J'analyse ensuite par HPLC UV/Vis à 254 nm avec une colonne C18 et une phase mobile constitué d'un mélange eau/acetonitrile (65/35).
Lors de mes tests de sélectivité, tout c’était bien passer, j'avais même conclu que l’étalonnage pouvais être réalisé dans de l'eau (pour une même concentration de PA, j'avais la même air sous la courbe pour les 2 matrices), ce qui facilitait pas mal le travail. Mais dés que j'ai essayé de faire mes études de linéarité, j'ai obtenue de grosses différences entre ces matrices. Mon problème vraisemblablement, est que je ne clarifie pas suffisamment ma matrice (j'ai d’ailleurs colmaté une colonne au cours de mes essaies, et les résultats obtenus sur un même échantillon différent fortement à chaque passage si je ne rince pas correctement la colonne).
Quelqu'un aurais t'il une idée pour améliorer mon traitement svp? Peut être ajouter de l'acetonitrile ou du méthanol dans ma solution précipitant?
Merci pour vos réponse.
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