Vocabulaire (fixation)

[invite58d2d622]

Bonjour,

Que veut-on dire lorsque l'on parle de fixation d'une cellule avant observation au microscope.

Merci,
-----

[piwi]

par fixation on entend préservation des structures afin d'eviter:

1. le pourissement
2. la dégradation durant le traitement

et pouvoir observer les dites strucutres.

Concrêtement la fixation consiste à ponter les différentes molécules de la cellule en les intégrant à un maillage plus ou moins fin crée par une molécule dite fixateur.
Il existe plusieurs types de fixation, exemples:
fixation proteique --> parformaldehyde, glutaraldehyde (interessant pour l'immunohisto (cyto))
fixation lipidique --> acide picrique tetroxyde d'osmium (très important en microscopie electronique.), l'acide picrique (utilisé en histologie)


On peut enfin utiliser des mélanges de différents fixateurs. Le plus connu est le liquide de boin (acide acétique qui fixe les protéines + acide picrique)

voilou...

[invite5351d78c]

Je tiens à apporter un petit supplément à la réponse de Piwi. On peut aussi fixer les cellules avec l'éthanol. Ce type de fixation est surtout utilisé lorsqu'on fait des colorations de Gram pour que les bactéries restent sur la lame lorsqu'on fait les différentes étapes de coloration.

Pour ça, on fait un frottis des cellules, on les dépose sur la lame, puis on met une goutte d'éthanol à 95° dessus, attends 1 minutes. L'éthanol s'évapore tout seul et laisse une tache blanchâtre à l'endroit où tu as déposé tes cellules. On pourrait peut-être appeler ça une fixation par déshydratation .

Voili, voilou,

[invitea0443c8c]

Salut!

Je tiens à apporter un petit supplément à la réponse de Piwi. On peut aussi fixer les cellules avec l'éthanol. Ce type de fixation est surtout utilisé lorsqu'on fait des colorations de Gram pour que les bactéries restent sur la lame lorsqu'on fait les différentes étapes de coloration.

Pour ça, on fait un frottis des cellules, on les dépose sur la lame, puis on met une goutte d'éthanol à 95° dessus, attends 1 minutes. L'éthanol s'évapore tout seul et laisse une tache blanchâtre à l'endroit où tu as déposé tes cellules. On pourrait peut-être appeler ça une fixation par déshydratation

Heu.....je crois qu'il y a confusion là! Dans la coloration de gram, l'éthanol sert à décolorer les gram- . Le but de cette coloration est justement de voir si l'éthanol est capable ou pas de passer la paroi de la bactos, pour en déduire si c'est une gram- ou une gram+ !
Pou fixer, on utilise la chaleur ou éventuellement l’alcool méthylique il me semble, et cette étape s’effectue après avoir laisser sécher les bactos à l’air (juste après l’étallement). Ensuite tu as la coloration proprement dite…

A+
Vinc

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite5351d78c]

Je sais très bien que l'éthanol est utilisé dans une étape de décoloration. Il ne passe pas les parois Gram + qui sont imperméables à celui-ci.

Mais ce qui est sûr, c'est qu'on nous a toujours dit 2 techniques de fixation au départ, que ce soit à la fac ou au lycée : la chaleur ou l'éthanol. Je peux pas en être plus sûr, pour avoir fait 2 ans en Bac STL et un stage de 1 mois en labo de microbio. De toute façon, ce sont toutes des techniques de fixation par déshydratation, peu importe la façon dont on déshydrate.

[invitea0443c8c]

Relis mon message. Je n'ai pas dit qu'on ne pouvait pas fixer à l'alcool. J'ai simplement rapellé qu'il y a d'autres techniques de fixation et que le rôle pricipal de l'éthanol, dans une coloration de gram, ce n'est pas de fixer mais de décolorer la bactos...

Vinc

[piwi]

on peut fixer à l'ethanol, à la chaleur.....
M'enfin, ce sont les plus mauvais moyens de fixer. C'est bien pour regarder avec une loupe, juste garder une trace.
Mais pour faire une étude plus fine et interessante c'est tres décevant.
C'est pour cela que je n'en ai même pas parlé.

Pour la coloration de Gram on fixe à la chaleur, pas à l'ethanol.

[invite5351d78c]

Pour ce qui est de la réponse de Piwi, va le dire à mes profs de microbio qui nous font fixer à l' éthanol. C'est pas parce-qu'on t'as pas appris de cette façon qu'elle est absurde. On a toujours fait de cette façon et ça a toujours bien marché! Certains fixent à l'éthanol, d'autres à la chaleur, les deux sont aussi efficaces, et tous les goûts sont dans la nature...

L'important c'est de déshydrater. On peut donc très bien imaginer que la fixation se fasse avec de l'acétone (un peu violent peut-être), de l'éther anhydre, ou n'importe quel autre solvant organique très volatile. Faut être un peu chimiste parfois!

[piwi]

C'est pas la peine de devenir agressif non plus....

Classiquement on ne fixe pas à l'ethanol...
Vous pouvez faire comme vous voulez apres tant que vous avez les resultats que vous souhaitez.
De toute facon dans les deux cas la fixation est pourrie alors bon