Hybridation Génomique Comparative (CGH)

[Kozak11]

Bonjour,

En révisant mon cours de Bio-génome , je me suis rendu compte que je ne maîtrise pas la Méthode d'Hybridation Génomique Comparative (CGH)
En effet , j'ai l'impression que quelque chose m'échappe et je ne comprend pas quoi! Ainsi ,j'ai besoin de votre aide:

Je me permet en amont de rappeler rapidement en quoi consiste cette méthode afin d'éviter les quiproquos :

-On a un ADN témoin que l'on colore que l'on marque en vert par fluorescence.De même ,on marque l’ADN que l'on veut tester avec un fluorochrome rouge.
-on mélange ces deux ADN en quantité égale
-on dépose le mélange sur des chromosomes en métastase afin d'opérer à une hybridation in situ
-Pour chaque gène des chromosomes,on observe la couleur :
Si pas de fluorescence alors ,hybridation égale du mélange avec les chromo en métaphases
Si fluorescence rouge :Excès d'ADN Test et donc amplification
Si fluorescence verte :Excès d'ADN témoin et donc délétion

Alors , ma première question est la suivante:Les ADN Test et Témoin sont-ils doubles brins ou simple brins ?Mais dans les deux cas , comment un ADN (double ou simple brin), peut-il s'hybrider avec l'ADN d'un chromosome en métaphase puisque ce dernier est double brin et ne peut donc pas accueillir un nouveau brin?

Ma deuxième question:Je ne comprend rien au marquage par fluorescence, déja , comment peut n'y avoir une hybridation égal et donc absence de fluorescence ? Et ensuite pourquoi fluorescence rouge =Excès d'ADN tests et délétion, Et pourquoi fluorescence rouge=Excès d'ADN Test et amplification(amplification de quoi d'ailleurs?)?

Voilà j'espère que j'ai été assez clair
Mille mercis d'avance
-----

[tic-tic]

Salut,

Alors avant de commencer, juste une précision : je doute que l'on réalise toujours de la CGH sur métaphases à l'heure actuelle, mais de la CGH-array. C'est le même principe mais sur des puces à ADN (jette un oeil si tu ne connais pas et reviens si tu as des questions).

A propos de la façon dont les sondes s'hybrident sur l'ADN double-brin des métaphases, je te conseille de regarder le schéma sur la page Wikipédia sur la FISH. Et autant en profiter pour se renseigner sur la FISH .

Ensuite, quand il y a hybridation égale, on n'a pas absence de signal, je crois que c'est orange pour la CGH sur métaphases, par contre c'est jaune pour la CGH-array (enfin...c'est jaune sur l'écran en tout cas). Je suppose qu'il n'y a pas forcément un brin du patient et un brin du témoin hybridés pour toutes les sondes, mais sur toute la longueur d'un chromosome, il y en a autant provenant de l'un comme de l'autre.

Pour ce qui est de définir les délétions et amplifications...je sais pas trop comment vous faites pour ne pas savoir ça et vous intéresser à la CGH

Cdt

[Kozak11]

Bonjour
D'accord pour la première question j'ai compris Merci
Cependant au sujet des couleurs et de leurs interprétations ,je n'arrive pas à comprendre ,la notion d'amplification dans le cas ou c,est vert?
Merci d'avance

[Kozak11]

Merci j-ai compris tout seul....Seul
On est partout et toujours
Seul
Des gens vous aiment, vous entourent
On se retrouve quand même et toujours
Seul
Avec un trop plein d'amour
Que l'on donne à une personne
Une seule
Mais qui au petit jour, au petit jour
Vous abandonne, oh
Vous abandonne

[A voir en vidéo sur Futura]

[Kozak11]

Seul
S’endormir seul quand le pire vous a pris le meilleur
Seul
Arriver seul au bout du chemin
Sans avoir peur
Des lendemains

Et s’endormir seul
Et s’endormir seul