Estimer la viabilité cellulaire avec un indicateur coloré

[Meiosis]

Bonjour,

Est-il concevable d'estimer la viabilité cellulaire avec un indicateur de pH coloré ? Je m'explique.
On prend un indicateur qui passe à une autre couleur pour un pH > 6 par exemple.
Initialement cet indicateur est en présence d'un pH < 6. On le met dans un liposome qui contient un pH < 6.
Ensuite on fait pénétrer le liposome avec cet indicateur et une fois dans les cellules le liposome va se dissocier et libérer l'indicateur qui va changer de couleur car le pH intracellulaire est d'environ 7.

On aurait pu directement mettre comme solution extracellulaire un pH < 6 comme ça pas besoin de liposome mais il pourrait y avoir deux inconvénients. Premièrement les cellules pourraient ne pas aimer ce pH (même si c'est transitoire) et deuxièmement l'indicateur coloré pourrait ne pas pénétrer dans les cellules comme ça (contrairement au test MTT dans lequel le MTT rentre tout seul).

Pour en revenir au test MTT il s'agit de mettre les cellules en présence de MTT qui est métabolisé par les mitochondries des cellules viables en formazan coloré (violet). Cependant de nombreuses molécules (anti-cancéreuses par exemple) interfèrent avec le métabolisme mitochondrial et donc peuvent fausser un peu les résultats dans les études de viabilité cellulaire en cancérologie.

C'est pourquoi j'ai pensé à l'indicateur coloré, la mitochondrie n'intervenant pas dans le processus de coloration des cellules viables.
Par contre il y a l'étape de transfection en plus et je ne sais pas s'il est possible de mettre une solution acide + indicateur coloré dans un liposome. On pourrait aussi commencer par une solution basique mais là aussi je ne sais pas si c'est possible.

Et peut-être d'autres critères de faisabilité également, j'aimerais avoir votre avis sur ce sujet.

Merci.
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[vpharmaco]

Je n'ai pas compris le lien que tu fais entre pH et viabilité cellulaire. L'intérêt du MTT, c'est qu'il mesure une activité métabolique, qui est un bon signe de la viabilité cellulaire.

Quoi qu'il en soit, ce n'est pas sondes de pH qui manquent ! Pas besoin de s'embêter avec des liposomes. Il y a une abondante littérature sur le sujet. Il suffit de passer commande https://www.thermofisher.com/us/en/h...ndicators.html

[Meiosis]

Imaginons un indicateur qui est rouge avant pH 6 et bleu après pH 6.
Les cellules ont un pH d'environ 7 dans le cytoplasme.
L'idée serait de faire rentrer cet indicateur coloré dans les cellules, initialement il sera rouge mais deviendra donc bleu une fois dans le cytoplasme.

Plus il y aura de bleu = plus il y aura de cellules, pas forcément viables (les cellules mortes ont aussi du cytoplasme).

Du coup ça servirait juste à déterminer qualitativement une quantité de cellules entre deux conditions (mortes + vivantes).
Il n'y a effectivement pas de lien entre pH et viabilité, je m'étais trompé dans mon message initial, puisque les cellules mortes ont aussi un cytoplasme de pH 7 (dans certains types de morts cellulaires en tout cas, si je ne me trompe pas).

[Flyingbike]

quel est le but alors ?

[A voir en vidéo sur Futura]

[Meiosis]

L'intérêt est du coup très limité, ça permettrait juste de voir la quantité de l'ensemble des cellules (mortes + vivantes).
Mais comme je l'ai dit je me suis trompé, en postant mon message initial j'avais en tête que les cellules mortes n'avaient plus de cytoplasme, je ne sais pas pourquoi. Et que donc ma technique permettait d'estimer la viabilité.