Bonjour,
J'ai une question à propos d'un résultat bizarre d'une q-PCR.
Elle a pour but de détecter la présence d'une maladie et sa variante dans des échantillons.
Les amorces on été designées en trouvant le peu de différences entre les deux séquences et ne peuvent pas trop être modifiées.
La PCR utilise aussi des sondes Taqman pour tester le 2 parties des gènes en même temps.
Le problème apparaît lorsque je teste un sujet sain, ou juste de l'eau. Il y a toujours une faible amplification de mes gènes! (les ct sont tardifs) et ce n'est pas du à des contamination exterieure.
Est ce que ca viendrait d'une dimérisation d'une des amorces avec la sonde? Combien faut il de nucléotides en commun pour qu'il y ai cette dimérisation?
Je ne peux pas faire de melt curve pour voir ca a cause des sondes taqman...
Autre soucis, dans certains cas, il n'y a pas du tout d'amplification du 1er gène chez un sujet malade alors qu'il y en a (une tardive) avec l'eau. C'est vraiment bizarre....
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