Microscopie à fluorescence et confocal

[invite8f71da1a]

Bonsoir, en biologie en ce moment nous étudions les différents types de microscopes et il est vrais que j'ai quelques difficultés. En effet j'ai du mal à différencier la microscopie à fluorescence (que je comprend plutôt bien) à la microscopie confocal (où j'ai beaucoup plus de mal ). Quelqu’un aurait t'il donc la gentillesse de m'expliquer quel est le principe du microscope confocal (plan focal etc..) et m’expliquer comment je peux différencier une image de microscopie à fluorescence et une de microscopie confocal. Merci d'avance
-----

[Loupsio]

Un microscope confocal estun microscope à épifluorescence (littéralement) avec des "options" en plus
le confocal permet d'observer sur une certaine épaisseur, au lieu de recueillir la lumière qui vient de partout (en haut et en bas de l'échantillion, tu nerecueille que la lumière qui vient d'un certain endroit (une seule hauteur) qu'on appelle le plan focal

Pour comparer avec l'épifluo, si tu as une cellule (ou disons plutot une racine pour que l'exemple soit parlant) a l'épifluo , du fait de l'épaisseur tu pourras pas focaliser et obtenir juste la fluo qui est à l'interieur, en plein milieu, si tu veut juste voir la zone en plein milieu tu vas devoir passer par une découpe au microtome afin d'avoir une fine tranche, tu peux mettre les sondes fluo (ex anticorps-FITC) sur cette tranche et tu verra cette zone là qui t'intéresse,
Au confocal tu peux obtenir cette meme "tranche" sans avoir a découper puisque tu peux ne récuperer que la lumière qui vient de cette zone, sans avoir a couper et isoler cette zone, tu ne verra pas la fluo qui vient des cellules au dessus et en dessous

Je parle de racine car c'est assez gros et on comprend mieux la notion de plan focal (à l'interieur) quand c'est gros, mais c'est pareil pour une cellule, situ veux voir de manière précise en un plan de la cellule et pas la fluo totale qui se trouve dans la cellule entière, avec un confocal tu peux obtenir la fluo de cette "tranche"

Et pour peu que tu balaye en tranches comme ca,de haut en bas, l'intégralité de ta cellule, tu peux ensuite faire une reconstruction 3D avec toutes les images que tu as acquises à des hauteurs différentes

J'espère que c'était assez clair, c'est le genre d'explication qu'il est plus simple de réaliser avec des schémas pour expliquer

Les images d'épifluo sont souvent moins belles que confocales, après lorsqu'on passe par une découpe microtome je trouve qu'elles se ressemblent beaucoup (mais je ne suis pas expert en microscopie, il y a peut etre des différences notable pour un oeil averti)

[invite8f71da1a]

Merci beaucoup, c'est beaucoup plus clair dans ma tête maintenant