dNTP dUTP et UNG

[invitefa99b43e]

Bonjour à tous,

Dans le cadre d'une qPCR, s j'ai bien compris, utiliser uniquement des dNTP permet d'augmenter la sensibilité car la taq incorpore plus facilement les dNTP que les dUTP.
Mais à priori utilisé des dUTP apporte une certaine sécurité à la manip' en cas de contamination avec des produit de PCR, mais pourquoi?
De plus il faudrait utilisé l'uracyl N glycolase pour hydrolyser les ADN simple et double brin contenant des dUTP.

Honnêtement le concept est un peu flou pour moi, pourriez vous m'aider à y voir plus clair svp.

Merci d'avance
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[invitefa99b43e]

Personne pour me répondre?

L'ARNm est constitué de AUGC, après RT on a un ADNc consitué de TACG. Mais je ne vois pas pourquoi il y aurait besoin de dUTP puisqu'en qPCR on amplifie de l'ADN. Je dois louper un truc.

Merci de votre aide

[Flyingbike]

en fait le concept de l'UTP (si je me souviens bien), c'est qu'on fait nos PCR avec de l'uracile à la place. Ca ne change rien à la réaction, ni à la quantification.

Sauf que dans le mix, il y a une enzyme qui dégrade tout l'ADN qui contient de l'uracile (et qui provient donc d'une réaction de PCR)

le concept du truc, c'est que le produit de PCR ne puisse pas servir de matrice dans une autre PCR, assurant que ce qu'on détecte, c'est bien l'ADN de l'échantillon, et pas une contamination par une autre réaction (parce qu'au bout d'une PCR, on a des kilos d'ADN, c'est donc très facile de faire des faux positifs quand le contaminant éventuel est en quantité écrasante par rapport à l'ADN échantillon)