biologie moléculaire;etude de fragments

[invite46b631a6]

bonjour,je fé des recherche en biologie et j'aimerais discuter dans ce domaine,j'ai bcp d'info a partager et je cherche toujours des info et des astuce pour ameliorer ce que je fé,merci d'avance
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[invite4ff72fd5]

"je fais"

Sinon il serait pas mal utile que tu développes un peu, pour commencer sur ton thème de recherche
Je veux bien partager des informations, et des astuces mais si tu donnes pas le domaine je peux rien faire

Cordialement
Paul

[Yoyo]

Bonjour

Tout d'abord il serait souhaitable que tu prennes connaissance de la charte de ce forum. Ca te permettrait d'eviter le SMS dans tes messages.

Apres si tu as des questions, n'hesite pas.

Yoyo

[invite46b631a6]

Désolé pour le premier message que j’ai envoyé ,j’ai pas bien lu la fin de la charte où il ne fallais pas écrire les mésanges comme des sms.
Et en ce qui concerne mes recherches, mon sujet porte sur l’étude d’un article sur la QF-PCR (quantitative fluorescence polymerase chain reaction) mais je m’intéresse a toutes les techniques de biologie et j’aimerais discuter avec quelqu’un qui utilise un appareil de séquençage et étude de fragment. Merci

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite46b631a6]

Bonjour,
Je remarque que personne ne s’intéresse à l’étude des fragments
merci

[Yoyo]

Faut pas etre si impatient que ca
Y'a tout plein de biologistes moléculaires sur le forum, tu ne discute pas en particulier avec une personne, mais avec plusieurs, alors si tu as des questions vas-y

Sinon pour repondre a ta question j'utilise souvent un séquenceur automatique ABI310, si tu veux des infos.

Yoyo

[invite56d68a15]

Je type des locus microsatellites par PCR multiplex (7 locus en même temps) puis éléctrophorèse sur un séquenceur capillaire.
Rien de quantitatif donc, mais on peut appeler ça une étude de fragments, je suppose.

[invite46b631a6]

Ce que je voulais dire par quantitatif c’est qu’on quantifie la fluorescence et par conséquent on peu savoir si l’anomalie existe ou non

[invite46b631a6]

salut
moi aussi j'utilise un ABI310 et je veux savoir d'autres applications possible ,moi je l'utilise dans l'étude de fragments pour la recherche des trisomies.
merci

[invite5351d78c]

Je vois ce que tu veux dire. En fait c'est une mesure quantitative du nombre d'amplicons je crois. Je suis désolé je m'en souvient plus trop, mais si ton sujet est important pour toi, alors je peux t'envoyer un scan d'un cours qui porte sur ça, et en détail en plus!

Ce que je peux te dire c'est que d'abord on trace une courbe-étalon avec des quantités connues d'ADN en fonction de l'intensité de fluorescence. En principe, on se débrouille pour que le fluorophore émette sa fluorescence que dans l'amplicon et non dans les amorces ou les nucléotides triphosphate. Et après....black hole in my memory, sorry

A+.

[invite46b631a6]

salut
si tu veux bien m'envoyer le cour pour comprendre plus
merci

[invite9dc70107]

Salut,

Pour la QF-PCR c'est une méthode d'amplification quantitative en direct, un gros avantage par rapport a une PCR classique ou une PCR semi-quantitative.
On utilise des amorces fluorescentes qui vont emettre une fluorescence une fois intégré dans l'amplicon (j'ai pas le détail en tete mais je crois que c'est par modification de l'extremité après ajout d'une base). Ensuite, la PCR est suivi en temps réel dans un appareil spécial qui trace au fur et à mesure la courbe d'amplification : on se trouve forcement dans la phase exponentielle de l'amplification sans faire de tests préalables ! On peut en plus faire plusieurs PCR dans le meme tube avec des amorces marquées avec des molécules fluorescentes différentes : fluorescence dans le rouge, le vert , etc : on obtient de jolie courbe de couleur . Je crois que cette méthode est assez récente et très utilsé en RT-PCR, pour l'étude des ARNm , mais elle est fortement concurencé par les puces a ADN !

A +

[invite46b631a6]

bonjour
je ne parle pas de la pcr en temps réel mais de l'etude de fragments sur un séquenceur apres pcr classique

merci

[invite9dc70107]

Et en ce qui concerne mes recherches, mon sujet porte sur l’étude d’un article sur la QF-PCR (quantitative fluorescence polymerase chain reaction)

A priori tu fais de la PCR avec de la fluorescence ! Si tu fais de la PCR classique, pas besoin de QF-PCR ! A priori pour identifier la taille de fragment ou les séquencer, rien de très compliqué ? je vois pas trop ce que tu veux savoir ???

[invite9dc70107]

Ce que je voulais dire par quantitatif c’est qu’on quantifie la fluorescence et par conséquent on peu savoir si l’anomalie existe ou non

si l'anomalie est présente ou pas , c'est du 0 ou 1 : donc du qualitatif, pas de besoin de quantifier quoi que ce soit !

[invite46b631a6]

salut
la quantité de fluorescence indique justement si l'anomalie et là ou non .
apres la pcr classique en utilisant des sondes fluorescentes on passe le produit de la pcr dans un Séquenceur et l'analyse des pics obtenues(surface) montre si il y'a l'anomalie ou non.
et je ne cherche rien a savoir de particulier je veux seulement discuter a propos de l'eude de fragments et du sequençage et savoir plus d'informations,
savoir d'autres applications par exemple a but Thérapeutiques
merci