Test ELISA ??

[invitebfb1e233]

Bonjour , à tous . J'ai vu un test pour tester l'action pharmacologique de medicament sur des recepteurs qui serait apparenté à un test ELISA . La technique consiste à fixer les cellules sur des palques multipuits , cellules ayant été transfectés exprimant des recepteurs tagés . Ensuite , on applique l'anticorps I , les substances à tester , puis l'anticorps II marqué . Enfin , on mesure la DO . Ceci est assez résumé , mais cette technique ressemble au principe de l'Elisa . Pouvez vous me dire de quelle technique il s'agit svp , et si c'est de l'Elisa de quel type ??

Merci d'avance de vos réponses , amicalement .
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[invitebfb1e233]

Bonjour à tous , apparemment cette technique n'inspire personne ?? Personne n'a déjà pratiqué cette technique ?? Je pensa à une méthode Elisa sur le principe , mais on ne fixe pas les cellules comme c'est le cas ici .

Merci d'avance de vos suggestions , amicalement .

[invitea2d7a4a0]

Salut, En immulogie j'ai vu la technique d'ELISA ici ca rappelle la méthode ELISA non compétitif appelé la methode indirecte. Je vais te donner le principe que j 'aui vu en immuno. On fixe les antigène sur une microplaque à puits, on ajoute le sérum contenant les anticorps a doser, on veut quantifier les anticorps circulant. On incube et on fait un lavage, on ajoute un 2 eme anticorps marqué donc anticorps anti anticorps marqué. Incubation lavage. On ajout des substrat coloré, et ceux ci vont réagir avec l'enzyme on obtiendra un produit coloré, qu on mesura la densité optique.
Voila j'espere que j'ai pu t eclairsir un petit peu

[invitea74c0747]

Bonjour,
ton test sert à quantifier la fixation d'une molécule sur un récepteur. C'est un test de compétition: on utilise un anticorps primaire dirigé contre le site sur lequel on souhaite évluer la fixation de la molécule. Si l'Ac I se fixe, la molécule ne se fixe pas et inversement. L'anticorps secondaire couplé soit à une peroxydase soit à un fluorophore te permet d'estimer la quantité d'Ac I fixée.
Et pour ce qui est des cellules, on les ensemence en microplaque, on traite par la substance à évaluer, et puis on fixe au formaldéhyde avant de faire le test ELISA.

D'autres techniques existent : si le récepteur est effectivement taggé , suivant les propriété de ce marquage, il est possible lorsqu'il y a interaction avec l'anticorps secondaire via le primaire, d'exciter le marqueur du récepteur qui réémet de l'énergie vers l'anticorps II , lui-même couplé à un fluorophore. C'est la fluorescence de celui-ci qui est alors mesurée. (FRET = Fluorescence Resonance Energie Transfert)

[A voir en vidéo sur Futura]