Transduction lentivirale

[invitea9bf5fe4]

Bonsoir tout le monde. J'ai fait une transduction lentivirale sur des lymphocytes T CD8+ dans le but d'augmenter l'expression d'un gène (système CRISPR). Une validation a d'abord été faite sur des cellules HEK qui n'expriment pas le gène de base et ça avait bien marché. J'ai eu une bonne efficacité de transduction sur mes lymphos par contre je n'ai pas augmenté l'expression du gène mais je l'ai diminué. Avez-vous une explication à ça ? Serait-ce parce que quelque chose dans la cellule down-régule le gène ?
Merci d'avance pour vos réponses.
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[Flyingbike]

Peut être

Vous avez quel type de promoteur ? il contient quoi en gros votre lenti ?

[invitea9bf5fe4]

Lequel des promoteurs ? Le lenti contient des ARNs guides, la dCas9, la GFP et un domaine activateur (VP64).

[Flyingbike]

et en quoi votre intervention devrait augmenter l'expression de la cible ? c'est un transgène ?

[A voir en vidéo sur Futura]

[invitea9bf5fe4]

Je crois que je n'ai pas été clair. En fait je veux augmenter l'expression du gène en utilisant le système CRISPRa délivré dans mes cellules d'intérêt (des lymphocytes T CD8) par une transduction lentivirale

[Flyingbike]

ben ce n'est toujours pas clair...
le système crispr il fait comment pour augmenter l'expression de votre gène ? c'est quoi le mécanisme ? on cible quoi ?