western blot

[invite2a3afad3]

BONJOUR a tous,

s'il vous plait j'ai besoin de votre aide. J'ai fait un SDS-Page, puis le Western blot sur 2 gels au même moment. Je constate déjà que le gel que j'ai colore immédiatement après le sds page, l'apparition des bandes est très faible. Pourtant le gel colore après western blot, nous montre une visualisation des bandes intenses. D’où déjà, nous avons pense au fait que le transfert total des protéines par semi-dry n'a pas eu lieu. Or nous avons observe le transfert partiel du marqueur. De ce fait nous avons utilise le gel transféré et avons refait le transfert par semi-dry et nous observons un transfert total.
J'aimerais savoir comment faire pour transférer toutes mes protéines par semi- dry? Est ce que le colorant (simple blue) a un effet sur le transfert total des protéines pour un semi-dry.

Cordialement,
Christy
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[Flyingbike]

Bonjour et bienvenue

e constate déjà que le gel que j'ai colore immédiatement après le sds page, l'apparition des bandes est très faible

`
c'est subjectif... quelle quantité de protéines ? quelle coloration ?

Pourtant le gel colore après western blot, nous montre une visualisation des bandes intenses

vous parlez de quoi ? de la membrane ? ou du gel après transfert ?
comment colorez vous ?

D’où déjà, nous avons pense au fait que le transfert total des protéines par semi-dry n'a pas eu lieu

parce qu'il vous reste des protéines dans le gel, c'est ça ?

il vous reste quoi, des hauts poids moléculaires ? un peu de tout ? une image pourrait aider !

De ce fait nous avons utilise le gel transféré et avons refait le transfert par semi-dry et nous observons un transfert total.

un transfert total c'est à dire que le gel est vide ? mais du coup vous avez transféré sur 2 membranes différentes ?

J'aimerais savoir comment faire pour transférer toutes mes protéines par semi- dry?

quel type de gel ? quel type de membrane ? quelle machine de transfert ? quels sont vos paramètres (temps, intensité, tension) ?

Est ce que le colorant (simple blue) a un effet sur le transfert total des protéines pour un semi-dry.

normalement non