Dilution antigène

[invite633a592e]

Bonjour à tous,

J'ai 14mg de protéine purifiée à 1.41mg/ml et je dois fais des dilutions en série de 5µg/ml à 1µg/ml.

Quelqu'un pourrait-il m'aider en m'expliquant en détails la manière de procéder ?


Merci d'avance pour votre aide.
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[dalmia]

Bonjour maChA8,

Il faut préciser un peu tout ça pour avoir tous les éléments en main

Pour tes dilutions en série, quel est le volume de chaque dilution à préparer ? 20 uL ? 1mL ? 500 mL ? On ne va pas raisonner de la même façon selon le volume final de chacun de ces tubes.

Autre question : combien de dilutions ? Cinq ? 5µg/ml / 4 / 3 / 2 et 1 ? Dix ? avec 5 / 4,5 / 4 / 3,5 / 3 / 2,5 / 2 / 1,5 / 1 / 0,5 ?

Autrement dit, de façon concrète : on est en train de faire quoi là ? Une gamme étalon pour un Bradford, un ELISA, un dosage spectrophotométrique ? C'est difficile de t'aiguiller sans contexte. On est pas juste en train de faire des maths ici, aussi un peu de biologie quand même

Ce qui m'a TOUJOURS aidée et ce qui m'a TOUJOURS été conseillé : dessiner !!! Dessine un bécher en écrivant les infos de la solution mère dedans, dessiner les 5 tubes Eppendorf où tu mettrai tes dilutions (si ça se prête à ta manip), écris les concentrations finales pour chaque et les volumes. C'est plus parlant que quelques lignes de consigne.

As-tu déjà entendu parler de facteur de dilution ? Peux-tu me calculer ce facteur entre ta concentration mère et la plus haute concentration fille ?

Bonne réflexion
Dalmia

[invite633a592e]

Bonjour Dalmia,

Merci pour ta réponse. Oui tu as raison il faut que je développe un peu.

J'aimerais faire un ELISA en testant les dilutions suivante 5µg/ml, 4µg/ml, 3.2µg/ml , 2.5µg/ml, 2µg/ml et 1.63µg/ml (donc facteur de dilution de 1.25), tout pour avoir 1600µl pour chaque dilution pour remplir chacun de mes puits (16puits, 100µl/puits).

En gros j'avais dans l'idée de prendre 14.18µl de ma solution de protéine à 1.4mg/ml que je met dans 3985.82µl pour avoir 4ml d'une solution à 5µg/ml.
Ensuite je voulais mettre 800µl de buffer dans chaque tube et puis prélévé 1.6ml de la premiere solution que je met dans la deuxième, puis préléver 1.6ml de la deuxième solution pour mettre dans la troisième et ainsi de suite.... mais ca ne va pas ... bref je bloque sur une bétise.

Merci de m'aider!