Plasmides rapporteurs et luciférase

[hydrolise]

Bonsoir,

J'ai deux petites questions concernant un exercice. Dans cet exercice nous avons un tableau (voir ci-joint) mais il y a quelques petites choses que je ne comprends pas. J’espère que vous pourrez m'éclaircir.

Ma première question est la suivante : Pour quelles raison les différents plasmides recombinants avec les différents gènes ne donnent ils pas, sans stimulation la même expression de la luciférase ?

Ma deuxième question concerne le plasmide pSRE-TATA-Luc. Je ne comprends pas son intérêt dans cette expérience .

Je vous remercie d'avance d'avoir pris le temps de me lire.


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[Flyingbike]

Pour quelles raison les différents plasmides recombinants avec les différents gènes ne donnent ils pas, sans stimulation la même expression de la luciférase ?

Parce que les plasmides peuvent fuir, c'est à dire qu'ils s'expriment un minimum même en absence de stimulus. Et ils ne fuient pas tous de la même façon.

Il manque cependant un controle majeur dans ces résultats : l'activité luc de cellules non transfectées ou transfectées avec un plasmide vide (idéalement le plasmide vide, sans promoteur)

Ma deuxième question concerne le plasmide pSRE-TATA-Luc. Je ne comprends pas son intérêt dans cette expérience .

le SRE est un court élément d'ADN rencontré dans le promoteur de LDLR et HMGCoA synthase. Il constitue l'élément minimal de ces promoteurs permettant une réponse aux stérols, d'ou son nom.

[hydrolise]

Merci pour votre réponse rapide.

Ma question va peut être vous paraître idiote mais je n'ai pas très bien compris pourquoi pour le plasmide recombinant avec les LDL qui devrait être le même que les autres je suppose, est il aussi bas par rapport aux autres plasmide ?

Une mauvaise transfection peut expliquer cela ?

[Flyingbike]

en fait, je n'ai pas bien formulé ma réponse précédente et ça ne vous a pas aidé.

Les promoteurs ont leur niveau d'expression propre, qui correspond à un niveau basal (dépendant de la structure du promoteur) plus ou moins l'expression liée au différents stimuli (qui dépend des éléments de réponse présents sur le promoteur). Ici le promoteur LDL-R a un niveau d'expression basale plus faible (qui dépend de sa structure propre et du contexte cellulaire).

Il y a un élément qui montre que le problème n'est pas lié à la transfection : le niveau d'expression de ßgal est similaire dans les 4 conditions

[A voir en vidéo sur Futura]

[hydrolise]

Je vous remercie pour votre réponse cela m'a bien aider