Immunofluorescence, Western blot, dosage colorimétrique...

[Gohuuu]

Bonjour, je repost en ayant grandement besoin de votre aide.

Je voulais savoir que permet la saturation des cellules dans la technique d’immunofluorescence.
J'ai entendu dire qu'elle permettait de limiter le bruit de fond mais je ne sais pas si c'est ça seule fonction.
Permet-elle d’amplifier le signal fluorescent, de marquer les noyaux ou de permettre l'accès des Ig aux antigènes

Je voulais également savoir à quoi sert l'utilisation d'anticorps secondaire dans le western blot, le dot blot et l'immunofluorescence.

Et comment peut-on étudier la localisation sub_cellulaire d'une protéïne, c'est à dire grâce à quelle méthode ?
Il me semblait immunofluorescence et western blot mais je ne sais pas si il m'en manque une ?

Bonne journée à vous tous et portez vous bien !

Gohuuu
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[Flyingbike]

Bonjour

Il est inutile de "reposter", les doublons sont interdits, et parfois les réponses prennent du temps à arriver

Je voulais savoir que permet la saturation des cellules dans la technique d’immunofluorescence.
J'ai entendu dire qu'elle permettait de limiter le bruit de fond mais je ne sais pas si c'est ça seule fonction.

Le but est essentiellement d'occuper tous les sites susceptibles de lier des protéines de façon non spécifique AVANT de mettre les anticorps, ce qui permet d'éviter qu'ils ne se collent partout et ne provoquent un bruit de fond

Je voulais également savoir à quoi sert l'utilisation d'anticorps secondaire dans le western blot, le dot blot et l'immunofluorescence.

1- cela permet l'amplification du signal. Plusieurs secondaires se lient a un primaire, on multiplie le signal
2- cela permet une utilisation modulaire. Avec un seul primaire, on peut selon les cas et les besoins le révéler avec un secondaire fluorescent en choisissant le fluorochrome, avec un anticorps couplé peroxydase, etc...

Et comment peut-on étudier la localisation sub_cellulaire d'une protéïne, c'est à dire grâce à quelle méthode ?
Il me semblait immunofluorescence et western blot mais je ne sais pas si il m'en manque une ?

En gros

1- soit on conserve la structure et on regarde ou se situe la protéine -> immunofluo, immunohistochimie
2- soit on fractionne la structure et on regarde dans quelle fraction se situe la protéine -> elisa, western blot, RIA....

[Gohuuu]

Merci flyingbike,

On peut donc dire que la saturation des cellules en immunofluorescence permet de saturer les sites antigéniques présents dans la préparation, de permettre l’accès des anticorps aux antigènes et de limiter le bruit de fond ? Mais ducoup, est que cela permet d'amplifier le signal ?

Pour l'utilisation des anticorps secondaire, on peut donc dire qu'en plus d'amplifier le signal, elle permet d'augmenter la spécificité du signal et de saturer les sites antigéniques et ainsi mettre en évidence le complexe antigène-anticorps primaire, grâce au fluorochrome

Pour ma dernière question, cela voudrait dire que l'on puisse ajouter à la liste le Fractionnement cellulaire ?

En te souhaitant une agréable journée.

Cordialement,

Gohuuu