taille d'insert maximum à liguer dans un vecteur
Bonjour,
J'ai une grosse question, aussi grosse que l'insert qu'il faut que je rentre dans un vecteur commercial. Voilà :
J'ai un insert de 7,4kb à rentrer dans le vecteur pEGFP-C3 qui a une taille de 4,7kb.
Est-ce qu'il y a une taille maximum à respecter pour l'insert, en fonction du vecteur utilisé??
Merci d'avance
Salut,
je ne connais pas le plasmide en question, mais d'une maniere generale, presque tout est possible, mais c'est juste un peu plus dur de cloner les grand inserts. si c'est du clonage classique (restriction/ligation) Il y aura un peu moins de reussite que pour un petit fragment, mais 7.4 ca reste tout a fait faisable. Il faut plus de ng d'insert pour obtenir le meme nombre de molecules.
Le principale probleme que j'avais eu avec a peu pres la meme taille d'insert et et de vecteur que toi venait des erreurs pendant l'amplifiaction par PCR, mais je ne sais pas si tu passes par la et de toutes facons, il y a des enzymes efficaces de nos jours.
Sinon, quand le plasmide produit est grand, il faut mieux transformer les bacteries par electroporation que par heat-shock. La qualite des bacteries est bien sur cruciale pour les clonages delicats
Bonne chance
Noun
Il n'y a normalement pas de problème.
J'ai cloné des tous petits inserts dans des gros vecteurs, et des gros inserts dans de petits vecteurs, il faut juste jouer un peu avec les ratios (par exemple liguer 50ng de vecteur avec 80ng pour un ratio 1/1, mais je conseillerai 1/10 et 1/20 juste pour voir) et peut etre avec l'enzyme CIP...
merci à tous les 2, je vais essayer comme ça, bien que j'ai déjà utilisé l'enzyme CIP, que j'ai essayer en ratio 3 et 10 et je transforme mes bactéries par électroporation...
En fait j'ai eu un cours sur le fait que certains vecteurs ne peuvent insérer que des fragments d'une taille leur permettant de faire une ligation correcte...
est-ce que quelqu'un a entendu parler de ça?
