Purification ADN en phase phenolique : séparation ARN et ADN en fonction du pH

[Superchaussette]

Bonjour ,

Je m’intéresse aux méthodes de purification de l'ADN et plus particulièrement de la purification en phase phénolique :

à savoir , lysat cellulaire - dénaturation des protéines (SDS ou autres détergent) et ensuite ajout de phénol + chloroforme pour isoler dans la phase organique les impureté (proteine , membrane et autres ) .

Ma question est la suivante : Selon mes cours de biomol , on peut retrouver l'ADN en phase aqueuse si pH > 7,5 , on a aussi de l'ARN en phase aqueuse si pH <5 .
et nous avons enfin les protéine à l'interphase.

Je ne comprend pas pourquoi le pH de la solution influence la solubilité de l'ADN / ARN en phasque aqueuse ou organique. Pourquoi les protéines se retrouve t'elle en interphase ? Par quel principe chimique ce phénomène a lieu ?
J'ai cru comprendre qu'il y a un lien entre la forme acide ou base conjugé de l'ADN par exemple qui joue sur son affinité avec la phase orga ou auqueuse... ?

Aussi la suite de la purification s'enchaine avec extraction de la phase aqueuse dans laquelle se situe l'ADN et addition d'alcool et de sels pour précipiter l'ADN isolé. Pourquoi l'ADN se précipite ?


Mes connaissances en chimie organique et minéral commencent à se faire vielle et sont imparfaite , je n'arrive donc pas a formuler d'hypothese ou de question suffisament précise pour me guider dans ma recherche sur internet !
Je confond solubilité , affinité , pH !! ma tete explose et ca deviens obsessionnel !


Merci d'avance pour vos réponses !! J'espere que mes questions sont compréhensible malgré mes confusions
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[Flyingbike]

pour la question précipitation : l'ADN n'est pas soluble dans l'alcool. Donc lorsque la concentration en alcool augmente, l'ADN précipite.

voir le wiki anglais :

Ethanol is much less polar than water, with a dielectric constant of 24.3 (at 25 °C). This means that adding ethanol to solution disrupts the screening of charges by water. If enough ethanol is added, the electrical attraction between phosphate groups and any positive ions present in solution becomes strong enough to form stable ionic bonds and DNA precipitation. This usually happens when ethanol composes over 64% of the solution. As the mechanism suggests, the solution has to contain positive ions for precipitation to occur; usually Na⁺, NH₄⁺ or Li⁺ plays this role .^[1]

Pour la question pH : l'ADN est plus rapidement neutralisé que l'ARN à pH acide, il "préfère" alors la phase organique que la phase aqueuse.