bonjour, j’ai plusieurs questions par rapport au protocole qui vise à mesurer la liaison spécifique d’un radioligand à un récepteur d’intérêt (il y a plusieurs choses qui me semblent floues, je peux essayer de developper ce que je crois avoir compris :

Protocole :
* Introduction des ligands radiomarqués : on introduit des ligands radiomarqués dans notre préparation membranaire enrichie en récepteurs qui nous intéressent
* Incubation : il y a incubation des ces ligands et des ces récepteurs
* Filtration : on filtre ensuite la préparation, qui contient les récepteurs qui nous intéressent, les ligands radiomarqués, et d’autres composés issus des membranes dont on s’est servies
* Rinçage : on élimine les radioligands non fixés
* Comptage de la radioactivité : la quantité de radioligands fixés correspond à la liaison totale : ces radioligands se sont fixés tant sur les récepteurs d’intérêts que sur les autres sites de liaison présents dans la préparation membranaire

[Première question
On effectue un rinçage pour se débarrasser des radioligands non fixés. Comment ça se fait qu’il y ait des radioligands non fixés, la liaison totale n’étant pas saturable, car égale à la liaison spécifique (saturable) + la liaison non spécifique (insaturable) ?]

[Deuxième question
Pourquoi d’ailleurs la liaison non spécifique est insaturable et la liaison spécifique saturable ?]

La liaison totale ayant été mesurée, on ajoute un ligand froid en grande quantité.
Il va entrer en compétition avec les radioligands au niveau des récepteurs d’intérêt.
En effet, on veut que le ligand froid se fixe sur les récepteurs d’intérêt à la place du radioligand, et qu’il les sature.

[Troisième question
Est ce que ça veut dire que le ligand froid est plus spécifique des récepteurs d’intérêt que le radioligand ne l’est ?]

On incube à nouveau.
On mesure la quantité de radioligands fixés en présence du ligand froid en excès.
Ce ligand froid en excès ayant saturé les récepteurs d’intérêt, on sait que la radioactivité émise correspond à la fixation des radioligands sur les récepteurs qui ne sont pas les récepteurs d’intérêt.
On mesure cette quantité de radioligands fixés : elle correspond à la liaison non spécifique.

Enfin, on retranche à la liaison totale initialement mesurée la liaison non spécifique finalement mesurée : on obtient la liaison spécifique, car :

liaison totale = liaison spécifique + liaison non spécifique, soit
liaison spécifique = liaison totale — liaison non spécifique

NB :
La liaison totale
Est la quantité de radioligands fixés aux récepteurs, d’intérêt et pas d’intérêt. C’est la quantité totale de radioligands fixés, à tout site de liaison de la préparation membranaire, qui contient, on le rappelle, plein d’autres composés en plus des récepteurs d’intérêt.

La liaison non spécifique
Est la quantité de radioligands fixés aux récepteurs qui ne sont pas les récepteurs d’intérêt, en présence d’un excès de ligands froids. Cette fixation est aléatoire : les radioligands peuvent se fixer à n’importe quel récepteur différent du récepteur d’intérêt.

La liaison spécifique
Est la quantité de radioligands spécifiquement fixés aux récepteurs d’intérêt.

[Quatrième question
Est ce que c’est la bonne définition des trois liaisons ?]

[Cinquièmes questions
Concernant les affinités, si on résume :
- le récepteur d’intérêt a une forte affinité pour le radioligand, et une affinité encore plus forte pour le ligand froid non ?
- quelle affinité les récepteurs qui ne sont pas les récepteurs d’intérêt ont pour le radioligand ? je crois qu’elle n’est pas spécialement forte, puisqu’ils ne sont pas spécifiques non ?
- et quelle affinité les récepteurs qui ne sont pas les récepteurs d’intérêt ont pour le ligand froid ? je crois que c’est faible, car on veut que ce ligand froid se fixe spécifiquement sur les récepteurs d’intérêt, afin de les saturer et de mesurer la liaison non spécifique non ?]

si quelqu’un saurait m’aider, merci !