Bonjour,
Je me permets de vous contacter concernant une question sur la construction des vecteurs viraux. Comme vous le savez, la production d'un AAV nécessite :
Un plasmide contenant le transgène
Un plasmide Rep/Cap
Un plasmide helper
Une cellule packaging (HEK293T) pour produire les vecteurs
Dans notre cas, nous avons sélectionné des plasmides sur Addgene afin de produire des AAV de sérotype 8, ce qui est optimal pour favoriser l’infection des cellules neuronales (ce dont nous avons besoin pour notre expérience --> mais le problème ne se situe pas là).
En examinant de plus près nos plasmides, nous avons remarqué que le plasmide Rep/Cap (AAV8R-12) contient un promoteur T7, ce qui implique la nécessité d’une polymérase T7. Or, cette polymérase est normalement exprimée dans des cellules bactériennes, comme E. coli (vous sentez le problème arriver...).
En nous référant aux documents fournis par Addgene sur ce plasmide, nous avons constaté qu’une expérience avait bien utilisé le plasmide Rep/Cap AAV8R-12 dans des cellules HEK293T. À première vue, on pourrait donc conclure que tout fonctionne !
Cependant, le "doute" s'installe : si le plasmide Rep/Cap AAV8R-12 est bien utilisé dans ces cellules, comment peut-il fonctionner alors qu’il est sous un promoteur T7 (sachant que le document ne stipule rien sur une quelconque T7 polymérase)?
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