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préparation des solutions tampons pour une électrophorèse sur gel d'agarose



  1. #1
    feriel20042001

    préparation des solutions tampons pour une électrophorèse sur gel d'agarose


    ------

    Bonjours a tous,

    Bien qu'étudiante en microbiologie, la chimie n'est pas mon domaine de prédilection !
    J’ai un TP concernant l’électrophorèse (étude du profil plasmidique) ou je dois préparer les solutions tampons suivantes :

    Tampon A :
    Tris- HCL 0.05 M
    EDTA 0.01 M
    Ajuster à pH 8 avec HCL

    Tampon B :
    Tris- HCL 0.05 M
    EDTA 0.01 M
    Ajuster à pH 12.42 avec NaOH puis ajouter du SDS à une concentration finale de 4%

    Tampon C :
    Tris- HCL 2 M
    Ajuster à pH 7 avec HCL

    Pour chaque tampon, le volume de la solution est de 100 ml.

    Pourriez-vous m’indiquer comment y procéder ? J’en ai vraiment besoin !!

    Merci d’avance.

    -----

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  3. #2
    raymond_la_science

    Re : préparation des solutions tampons pour une électrophorèse sur gel d'agarose

    Bonjour
    Pour réaliser ta préparation, tu as besoin de certaines informations qui sont indispensables.
    qu’est-ce que le Tris (et quel est son pK)
    que représente M et qu’est-ce qu’une solution M
    qu’est-ce qu’une solution à X %
    ensuite tu pourras faire des propositions de préparation
    Bon courage
    rls

  4. #3
    HarleyApril

    Re : préparation des solutions tampons pour une électrophorèse sur gel d'agarose

    Bonjour
    La méthode de Raymond la Science te permettrait de faire les calculs théoriques.
    En bio, on prépare les tampons comme décrit, on trempe un pH mètre dedans et on ajoute le dernier réactif (soude ou acide chlorhydrique) petit à petit pour arriver au pH souhaité.

    Si c'est le M qui te gène, voici un exemple pour le tampon C
    tu veux un tampon Tris-HCl 2M=2mol/L
    la masse molaire est 157.60g/mol
    Pour 100mL de solution
    tu as besoin de 0.2mol de Tris-HCl soit 31.52g
    tu les mets dans une fiole jaugée de 100mL
    tu ajoutes environ 90mL d'eau
    tu ajustes le pH par ajout d'acide chlorhydrique
    tu complètes au trait de jauge par de l'eau

    en espérant t'avoir débloqué

  5. #4
    feriel20042001

    Re : préparation des solutions tampons pour une électrophorèse sur gel d'agarose

    Merci pour vos réponses !

    Le problème c’est que le tris-HCL est un mélange de 2 composés (le tris et le HCL), alors comment peut-on prélever 31.52g à partir de ce mélange ?

    Sachant que le tris c’est l’ hydroxyméthyle aminométhane, sa masse molaire est de 121.14 g/mol, son pka est de 8.4
    EDTA c’est l’éthylène diamine tétra acétique, sa masse molaire est de 372.23 g/mol, son pka est de 2, 2.7, 6.2 et 10.3
    SDS c’est le sodium dodecyl sulfate, sa masse molaire est de 288.38 g/mol
    M représente la concentration molaire mol/L
    Et X % représente la concentration en pourcentage (poids / volume)

    Alors comment faire ?

  6. #5
    raymond_la_science

    Re : préparation des solutions tampons pour une électrophorèse sur gel d'agarose

    Bonjour
    Tu as un peu avancé dans ta recherche. Il te suffit maintenant de suivre les indications données par Harley-April, faire une pesée de Tris en quantité suffisante selon la concentration recherchée puis mise en solution dans une fraction du solvant et addition des éventuels réactifs (EDTA SDS etc) ajustement au pH désiré par HCl en utilisant un pH-mètre correctement étalonné enfin ajustement au volume prescrit en fiole jaugée.
    Tu as indiqué la valeur correcte de M =121,14 g/mol.
    Le pK n’est pas une donnée immédiatement nécessaire, elle permet simplement de localiser la zone de pouvoir tampon maximum (ici aux alentours de 8.4)
    Bon courage
    rls

  7. A voir en vidéo sur Futura
  8. #6
    feriel20042001

    Re : préparation des solutions tampons pour une électrophorèse sur gel d'agarose

    Bonsoir,
    Je ne me suis pas encore sortie!
    Combien on prélève de Tris et de HCL à partir de 31.52 g du mélange?
    Après avoir ajusté le pH à 7 avec du HCL, est ce que l'ajout de l'eau n'influence pas ce pH?

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