Précipitation des protéines

[invite9ceb2e6b]

Bonjour a tous,

voila j ai encore des ti soucis ...

j'ai au depart un échantillon qui contient des protéines et des lipides et autres "crasses". le but de la manipulation est de purifier mes protéines. (de les isoler du reste)

lors de la manip, on met l'échantillon dans un tampon phosphate
ensuite on centrifuge a plusieurs reprises...
après chaque centri, on enlève la couche supérieure car elle contient les "crasses+lipides"...

voila ma kestion:
keski fait précipiter mes protéines??? le PBS car il contient des sels?
ou mes centrifugations? dans ce cas comment cela se fait-il que mes lipides ne précipitent pas aussi???

Merci d avance pour votre aide
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[Zellus]

Bonjour,

Tu es sûr que tes protéines précipitent ? Le PBS ne permet pas en tout cas de les faire précipiter.
Donc si tu pouvais apporter quelques précisions s'il te plaît :
Qu'est-ce qu'il y a exactement dans ton échantillon de départ ?
Quel est ton protocole de centrifugation ?
Moi j'ai juste l'impression que les lipides viennent à la surface car ils sont hydrophobes et que la centri sert juste à accélérer la séparation.
Tu as un culot au fait ?

[invite9ceb2e6b]

Non c est exact je me suis trompée en redigeant ma question...

en fait j ai pas vraiment de précipitation...
ce que je voulais dire c est ke mes protéines vont dans le fond de mon tube et les lipides restent à la surface... on voit la limite entre les deux couches grace a la consistance et a la difference de couleur...

donc ma question serait plutot pourquoi les protéines vont dans le fond et les lipides restent a la surface?

merci

[invite9b06c290]

mon avis : les "grosses molécules", à savoir les protéines, sédimentent plus vite que les "petites molécules" : tes sels et tes lipides.
Les g de la centrifugeuse accélèrent le phénomène.

[A voir en vidéo sur Futura]

[HarleyApril]

bonsoir
l'huile reste sur l'eau, tout simplement
c'est une question de densité
cordialement

[Zellus]

l'huile reste sur l'eau, tout simplement
c'est une question de densité

+1 pour HarleyApril. C'est aussi ce que je pense.