Bonjour,
Je suis en train de faire un projet sur une méthode de dosage du paracétamol dans l'urine, et j'ai un problème de compréhension sur un chromatogramme.
En effet, sur le chromato, les pics de deux métabolites différents (PG et PS) sortent aux mêmes temps de rétention et je ne comprend pas pas pourquoi. (??????)
Est-ce que quelqu'un pourrait m'expliquer???
Merci d'avance!!
Personne ne sait pourquoi tel produit avance vite ou lentement en chromatographie. Les rf sont des valeurs empiriques. C'est un peu comme les points de fusion, les solubilités. On ne peut pas les expliquer.
Bonjour,
Une seule solution dans ce cas : trouver un autre couple phase/solvant pour faire la chromato, OU parfois, garder le même couple en changeant la température (parfois veut dire en fait : assez rarement pour avoir une variation significative).
ou encore ... faire des run plus longs. J'ai bossé sur un projet où on faisait des runs de 40 min pour pouvoir séparer differents metabolites
Merci pour vos réponses.
Pour vous en dire un peu plus, le projet que je fait est en fait une traduction d'article scientifique sur une méthode particulière de dosage du paracétamol. Je pense en fait que je ne comprend pas ce chromato car je n'ai pas bien traduit la partie de texte qui s'y reporte.
Peut être que si vous pouvez m'aider sur ce point là, ça m'aidera d'autant plus.
As seen in Fig. 2, both PG and PS produced
two MRM peaks at the same retention time as the main
peak: one due to the monitored MRM transition
(328 fi 152 m/z ion for PG and 232 fi 152 m/z ion for
PS) and another due to an additional secondary transition
of 152 fi 110 m/z ion (for both PG and PS because
both produce 152 m/z ion from the primary transition) .
Because the method is set up to detect 152 fi 110 m/z
ion (as the primary transition for paracetamol), the secondary
transition of PG and PS (which is the same as
the primary transition of paracetamol) is also detected
at their respective retention times (second trace of PG
and PS peaks in Fig. 2). This gave an additional degree
of confirmation for PG and PS (in addition to retention
time and the primary MRM transition), increasing the
specificity of the method for these two analytes.
Merci!
Pour qu'on puisse te répondre valablement, il faudrait qu'on sache d'abord de quoi tu parles.
S'agit-il d'une chromatographie en phase gazeuse ou liquide ?
Quelle sorte de détecteur utilises-tu ? Est-ce un détecteur par spectrométrie de masse, ou par radioactivité ? Il semble que cela puisse être le cas, car ton diagramme reporte des cps en ordonnées. Et cps pourrait signifier coups par seconde, donc une mesure de radioactivité.
Ce qu'il faudrait aussi savoir, c'est la signification d'abréviations peu courantes comme MRM ou fi.
j'avais déjà indiqué le méthode d'analyse dans le titre (LC-MS/MS) soit chromatographie liquide avec couplage spectromètre de mass tandem. fi n'est pas une abréviation mais un mauvais copié collé qui représentait un flèche --> (dsl je n'avais pas vu ce détail); MRM signifie Multiple Reaction Monitoring, c'est un mode de détection qui permet de choir les ions moléculaires et fragments que l'on souhaite analyser.
J'ai une petite idée de ce que le paragraphe signifie, j'aimerais juste avoir un autre avis pour confirmer mon idée.
Merci
Le texte est confus car il est indiqué qu départ que les métabolites PG et PS ont le même temps de rétention, puis on parle de leur temps de rétention respectif.
Le texte indique en outre qu'il est facile d'identifier PG et PS car ils présentent des transitions différentes, puis il est indiqué que les deux présentent la transition 152 fi 110 m/z.
Le chromatogramme provient de l'article ou de tes manips ?
PG et PS co-éluent clairement mais apparemment la masse du pic moléculaire est différente (et donc la première transition).
Il ne doit pas y avoir de problème pour quantifier l'un et l'autre, même si le temps de rétention est identique (ce qui me gène beaucoup pour deux métabolites très différents : la méthode LC a-t-elle été baclée ?)
Ou alors je n'ai rien compris et les deux ne co-éluent pas...
Aurais-tu la légende de tes transitions MRM pour chacun de tes pics?
(Autrement dis, qui correspond à quoi car je t avouerai que le texte ne le dis pas clairement pour moi...)
Peut-être un peu tard pour répondre mais il me semble en coup d'oeil que tes métabolites sont tout bêtement coélués parce qu'ils ne sont pas retenus sur ta colonne. En effet, des métabolites sont plus hydrophiles que les molécules mères (puisque le but de la métabolisation est d'éliminer les molécules de l'organisme par les urines), ce qui peut se traduire à la longue par une non rétention de tes composés sur colonnes classiques.
