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dHPLC



  1. #1
    Mélusine7

    dHPLC


    ------

    Bonjour,

    J'aimerai savoir pourquoi l'absorbance est en mV sur le graphe qu'on obtient des hétéroduplexes et des homoduplexes (f(temps)=absorbance (mV)).
    Je voudrai aussi avoir des informations sur le décrochement du TEAA/ADN grâce à l'acétonitrile, savoir si il se fixe sur la colonne, comment il intervient sur la liaison faible.

    Merci d'avance

    -----

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  3. #2
    Mélusine7

    Re : dHPLC

    Personne ne connait le fonctionnement du dHPLC?

    J'ai plein d'autres questions comme:

    - Comment l'acétonitrile fragilise les liaisons entre le teaa et la colonne?
    - Est-ce que l'acétonitrile se fixe sur un des deux ou est éluée?
    - Comment fonctionne le dégazeur pour les tampons?
    - Quand sont injectés les échantillons d'ADN?
    - Comment fonctionne l'accélérateur?

    J'espère que quelqu'un s'y connait ...

  4. #3
    LXR

    Re : dHPLC

    Discussion déplacée biologie -> chimie.

    Expliques rapidement comment fonctionne cette colonne, son principe. A partir de leurs connaissances, je pense que les chimistes te répondront sans problème.

    Greg

  5. #4
    Mélusine7

    Re : dHPLC

    Bonjour ,

    alors c'est une colonne hydrophobe non poreuse, le tampon a contient du TEAA une molécule amphiphile qui permet de faire le lien entre la colonne et l'ADN chargé -.
    Cette méthode permet de séparer les hétéroduplexes des homoduplexes, le TEAA/ADN est élué par de l'acétonitrile.
    La concentration d'acétonitrile augmente en fonction du temps pour décrocher en dernier les homoduplexes.

    Si quelqu'un à une explication toujours pour l'acétonitrile et l'absorbance en mV?

  6. A voir en vidéo sur Futura
  7. #5
    Gramon

    Re : dHPLC

    pour l'absorbance regarde quel type de détecteur à ton HPLC, ça pourrait venir de ça.

    c'est possible que ce soit pas de l'absorbance mais autre chose qu'il mesure

  8. #6
    Gramon

    Re : dHPLC

    il me semble que ce que tu fait s'appèle ou s'apparente à la chromatographie de paire d'ion.

    pour l'acétonitrile, l'explication est:

    -tu diminue la concentration en TEAA dans la phase stationaire
    -et tu diminue la concentration en eau de la phase mobile, ce qui fait que les effets hydrophobes diminuent. (tu rend ton solvant moins polaire)

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  10. #7
    jgiovan

    Re : dHPLC

    Bonjour tout le monde,

    S'agit-il d'un détecteur UV ?

    Dans tous les cas, en fonction du logiciel, les détecteurs renvoient des résultats dans des unités parfois sybillines. Il est en général possible de changer l'Unité, mais ca n'apporte pas grand chose...

    Pour ce qui est de tes questions :
    J'ai plein d'autres questions comme:

    - Comment l'acétonitrile fragilise les liaisons entre le teaa et la colonne?
    - Est-ce que l'acétonitrile se fixe sur un des deux ou est éluée?
    - Comment fonctionne le dégazeur pour les tampons?
    - Quand sont injectés les échantillons d'ADN?
    - Comment fonctionne l'accélérateur?

    J'espère que quelqu'un s'y connait ...
    - l'effet de l'acétonitrile sur l'élution a été expliqué
    - l'acétonitrile ne se fixe pas, il traverse la colonne en emportant la TEAA fixée à l'ADN
    - le dégaseur comporte une membrane poreuse et une pompe à vide. Sous l'effet du vide, le gaz dissous dans le solvent est évacué à travers la membrane.
    - Les échantillons d'ADN sont injectés un peu avant l'entrée de la colonne (en général au niveau d'une valve d'injection type rheodyneTM
    - Peux-tu détailler ce que tu appelles un accélérateur ?

  11. #8
    Mélusine7

    Re : dHPLC

    Bonjour,

    Merci beaucoup pour vos réponses .
    Il s'agit d'un détecteur UV (lampe au deutérium), pour l'accélérateur je sais juste qu'il est interne(marqué dans le guide transgenomic) et que j'utilise n dHPLC 3500HT, j'en sais pas plus.

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