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optimisation dHPLC



  1. #1
    Camboui

    Smile optimisation dHPLC


    ------

    bonjour,

    J'utilise la dHPLC pour identifier des mutation sur les exon d'un gène. J'aurais aimé savoir sur quels facteurs il est possible d'intervenir pour diminuer les épaulements que j'obtiens lorsque je passe mon témoin (adn sans mutation) j'ai déja essayé de diminuer la concentration en MgCl2 lors de la PCR mais j'ai peur que si je la réduit encore je n'obtienne plus de produit PCR.

    merci d'avance pour votre aide

    -----

  2. #2
    jmbowie

    Re : optimisation dHPLC

    Citation Envoyé par Camboui Voir le message
    bonjour,

    J'utilise la dHPLC pour identifier des mutation sur les exon d'un gène. J'aurais aimé savoir sur quels facteurs il est possible d'intervenir pour diminuer les épaulements que j'obtiens lorsque je passe mon témoin (adn sans mutation) j'ai déja essayé de diminuer la concentration en MgCl2 lors de la PCR mais j'ai peur que si je la réduit encore je n'obtienne plus de produit PCR.

    merci d'avance pour votre aide
    Essaie peut-être de purifier ton produit de PCR sur colonne de kit avant? Ou de travailler avec des enzymes proofreading pour éviter d'avoir des sous-produits mutés?

  3. #3
    Mélusine7

    Re : optimisation dHPLC

    Bonjour,
    Mon mapitre de stage m'a expliqué que purifier ses produits de PCR changeait pas grand chose, étant donné que l'ADN qui reste non spécifique est trop "gros" pour être purifié et les dntp, primers qui restent ne vont pas être détectés.
    Par contre les enzymes proofreading m'intéresse, je voudrai bien savoir leurs origines?
    Je suis en stage et je dois cribler des mutations à partir du dHPLC, j'aimerai bien avoir des informations sur ces enzymes car pour les exons 18 à 21 les résultats sont peu fiables.
    Merci d'avance !

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