Rendement chromatographie sur colonne

[invite0641d115]

Bonjour à tous,
J'ai réalisé la séparation de deux acides aminés à l'aide d'une chromatographie sur colonne. Après réaction à la ninhydrine et formation du pourpre de ruhemann, j'ai passé mes tubes au spectro pour connaitre leur concentration à l'aide de ma courbe d'étalonnage.
En fait j'aurais aimé savoir si les rendements de récupération d'une chromatographie sur colonne sont plutôt bons car les miens me paraissent assez important 75% pour un acide aminé et 86% pour l'autre.
Merci de votre aide.
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[invite088c2894]

Bonjour, en fait tout dépend de la masse que tu as déposé, mais en général il est clair que ce rendement est bon ^^

[invite0641d115]

Ok merci de ta réponse, en fait j'ai déposé 3mg de l'un et 1,5mg de l'autre. Si d'autres personnes peuvent me confirmer que les rendements sont généralement bons je suis preneuse. Pendant que j'y pense, un technicien de labo m'a dit que l'acide aspartique ne fonctionnait pas bien avec de la ninhydrine quantitative, la coloration des tubes était très faible. Quelqu'un peut-il confirmer ou apporter son expérience ? cela me parait étrange je ne comprends pas pourquoi cela ne marcherait pas. Merci de vos réponses, c'est gentil d'essayer de m'éclairer.

[invite42d02bd0]

Ok merci de ta réponse, en fait j'ai déposé 3mg de l'un et 1,5mg de l'autre. Si d'autres personnes peuvent me confirmer que les rendements sont généralement bons je suis preneuse. Pendant que j'y pense, un technicien de labo m'a dit que l'acide aspartique ne fonctionnait pas bien avec de la ninhydrine quantitative, la coloration des tubes était très faible. Quelqu'un peut-il confirmer ou apporter son expérience ? cela me parait étrange je ne comprends pas pourquoi cela ne marcherait pas. Merci de vos réponses, c'est gentil d'essayer de m'éclairer.

Normalement le rendement d'une chromato se doit d'être 100%

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite5fba087a]

Après isolation de produit sur une colonne, un rendement de 75-85% est plus qu'accepatable.

Si tu as eu un redement de 100%, ta chromato ne sert à rien.

[invite441f4daf]

Excellent rendement pour moi ^^. Je voudrais bien aussi bien
Fajan> Si tu as un rendement de 100% sur ta colonne soit tu as rien purifié du tout, soit ton produit est déjà pur. Dans les deux cas, ta colonne est inutile.

[invite42d02bd0]

Excellent rendement pour moi ^^. Je voudrais bien aussi bien
Fajan> Si tu as un rendement de 100% sur ta colonne soit tu as rien purifié du tout, soit ton produit est déjà pur. Dans les deux cas, ta colonne est inutile.

On se comprend mal...

Je mets x grammes d'un produit pur sur ma colonne, je dois retrouver les x grammes en sortie.

Maintenant si je purifie un mélange x+y g de produits sur la colonne, je dois retrouver x g du produit 1 et y g du produit 2.

Par contre, le fait de demander "j'ai un mélange x+y combien de x et de y vais je retrouver après colonne" est complètement stupide...

Une séparation chromatographique doit donner un rendement proche de 100% !

Si la séparation donnait à chaque fois 75-85%, aucune réaction organique n'aurait un rendement qui dépasse les 85%... Ridicule!


Quant au fait qu'une réaction qui donne 100% ne nécessite pas de purification, c'est encore une affirmation ridicule... A+B --> C+D et moi je ne veux que le produit C... Voilà qui devrait convaincre tout le monde!

[invite5fba087a]

En effet, on a mal du se comprendre.

En revanche, si le Rf des produits n'est pas suffisamment différents. Alors il n'est pas possible de récupérer la totalité de chaque produit pur.
Ce qui est très très souvent le cas.

On appelle ça les fractions mélangés. (récipient avec plusieurs produits).

A partor de là il n'est pas possible d'avoir 100% de rendment en chromatographie.

[invite42d02bd0]

En effet, mais il suffit de changer d'éluant pour avoir une meilleur séparation. Mais après c'est un peu au feeling, j'ai des collègues qui arrivent à séparer des produits qui diffèrent de 0.05 de Rf sans aucune fraction mélangée.

Si maintenant on se penche sur le problème de manière plus pratique, un rendement de 100% reste en effet irréaliste (surtout sur petite quantité) et ce pour plusieurs raisons : Perte en transvasement, trop grande dilution après la chromato (difficile à révéler) ou pire dégradation d'une partie du produit par l'acidité de la silice.

[invite5fba087a]

Il faut voir les colonnes qui'ils se tapent tes collègues...

et le reste je sais déja, c'est un peu mon métiers

[invite0641d115]

Merci de vos réponses j'y vois déjà plus clair. Par contre, l'un de vous n'a t-il jamais fait de réaction à la ninhydrine avec l'acide aspartique par exemple, j'aurais bien voulu savoir s'il fonctionne pour un dosage quantitatif avec la ninhydrine.

[invite665a0d0b]

Bonjour
A priori, comme tu le notais dans ta question, il n'y a pas de raisons pour que la ninhydrine ne fonctionne pas avec l'aspartique. Les principales difficultés se rencontrent avec la proline et les acides aminés soufrés comme la cystéine et la cystine. La réaction avec la ninhydrine est utilisée comme critère d'identification de l'aspartique et les analyseurs automatiques avec dérivation post colonne à la ninhydrine (modèles anciens) permettent de quantifier l'aspartique qui sort en général rapidement.
Cordialement
rls

[invite0641d115]

D'accord, merci de ta réponse et bon week-end à tous.