Chromatographie

[invitebe5b95e4]

Bonjour
je fais de la séparation des 3 composés en HPLC de phase inverse. J'ai défini un gradient d'élution (eau / acétonitrile) permettant une bonne sépartion de 2 mes composés, mais seulement le 3ième composé sort dans le volume mort de ma colonne. La modification de mon gradient n'a rien changé à cela. On m'a donc conseillé de changer de solvant, de remplacer l'acétonitrile. Et de choisir un nouveau solvant, en jouant sur les notions de polarité et de proticité. A priori, il me faut un solvant moins polaire, comme le méthanol, mais par rapport à l'acétonitile, il est protique.
Ma question est en quoi la proticité d'un solvant va-t-elle jouer sur ma séparation? et quel solvant puis-je utiliser dans ce cas?
merci
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[invitea69ab818]

La proticité joue un role au niveau des liaisons hydrogènes éventuelles. Par contre le changement de colonne peut aussi jouer un role. Une colonne phenyl retiendra plus de composé aromatique qu'une colonne C18. De même une colonne NH2 (voire CN)retiendra plus un composé protique.
Mais si tu me donnais le nom de ton composé voire de ton mélange je pourrai mieux voir quel est le problème et si j'arrive à faire avancer le schmilblick

[invitebe5b95e4]

salut
mes composés sont les composants du sérum human, donc essentiellement 2 protéines l'albumine et la transferrine (des macromolécules), et le troisième composé est une nanoparticule : des liposomes chargés négativement d'une taille de 100nm. C'est cette molécule qui sort dans le volume mort, et ce n'est pas un problème d'exclusion stérique (j'ai vérifié), c'est juste mon gradient qui ne doit pas être adapté. Je travaille sur une phase C4, normalement adapté aux protéines. Je ne sais vraiment plus comment faire

[invite088c2894]

Salut, tu peux ajouter un peu de HCl genre 1% ou 2 pour protoner partielement ou faire un gradient de pH, Sinon bah tu passes en échange d'ion mais bon pas d HPLC dans ce cas

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite9b06c290]

Bonjour,

Les liposomes posent un problème car ils sont chargés. Tu peux contourner ce problème soit en jouant sur le pH de ta phase aqueuse (tout dépend du type de fonction chimique à la surface), soit en faisant de la chromatographie de paire d'ion (en venant masquer les charges avec un ammonium quaternaire par exemple). Le tetrabutylammonium est utilisé dans ce genre de cas.