Techniques d'identification des alcaloides du quinquina

[invite24e14f50]

Bonjour!

Je suis embêtée car j'ai un rattrapage qui arrive bientôt, et que je me rend compte qu'il y a certaines questions de mon examen précédent auxquelles je n'arrive toujours pas à répondre, même avec mon cours. Et sur internet je n'arrive pas à trouver de réponse non plus. Si quelqu'un pouvait m'aider ce serait vraiment génial!

Voici les quelques questions qui me posent probleme:

"la quinine contenue dans un comprimé peut etre dosee par spectrophotometrie UV, par fluorescence ou par CLHP avec un detecteur UV. Il faut d'abord etablir une courbe d'étalonnage en fonction de la concentration de plusieurs solutions à concentration connue.

question1:quelle est la grandeur qui varie avec la concentration pour chacune de ces trois methodes? ( je suppose que pour la spectrophotometrie, la grandeur qui varie est l'absorbance, et que par fluorescence la grandeur qui varie est la fluorescence??? pour la CLHP je ne sais pas par contre, peut etre la vitesse de migration?)

question 2: Dans certaines conditions operatoires, en fluorescence, on peut observer une augmentation du signal lors d'une dilution de la solution. Expliquez ce phénomène. (je crois qu'il s'agit du phénomène de filtre interne, mais a quoi est il du?)

question 3: expliquez pourquoi le dosage par fluorescence implique des concentrations en analyte significativement plus faibles qu'en spectrophotometrie uv-visible? Quels sont donc les avantages et inconvénients du dosage par fluorescence en comparaison avec l'uV-visible et la CLHP?

D'apres la pharmacopée européenne, une solution de chlorhydrate de quinine dans l'acide sulfurique dilué exposée a la lumier ultraviolette à 366nm possede une fluorescence bleue qui disparait presque completement par addition d'acide chlorhydrique concentré.

question 4: expliquez pourquoi la fluorescence est atténuée par l'ajout d'acide chlorhydrique concentré.

on sait par ailleurs que la quinine possede trois maxima d'absorption (250,317, et 348 nm), dont celui de 250 nm est le plus intense

question 5: pourquoi n'utilise t'on pas le maximum d'absorption a 250 nm pour l'excitation de la fluorescence? ( il me semble que c'est parce qu'a 250 nm on obtient un spectre d'intensité plus bruité a cause de la photodegradation, mais pourquoi? et qu'est ce que la photodegradation exactement?)

pour la mise en evidence des autres alcaloides du quinquina, la pharmacopée propose une chromatographie liquide CLHP sur une colonne octadécylsilylée en utilisant une phase mobile tampon phosphate ph 2.8 avec 6% d'acetonitrile

question 6:expliquez brievement le role des constituants de la phase mobile: acetonitrile, eau, phosphate monopotassique, acide phosphorique.

question 7: pourrait on maintenir le meme pourcentae de solvant organique si on utilise un tampon ph 7.0, expliquez
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[invite24e14f50]

personne ne peut me répondre? ):

[obi76]

Bonjour,

en chimie ce sera sans doute mieux....

pour la modération,

[invite24e14f50]

[A voir en vidéo sur Futura]

[citron_21]

Salut,

question 1 : tu dois comprendre ces différents principes pour savoir en quoi ils peuvent être adaptés pour une méthode de dosage. Spectrophotométrie : oui c'est l'absorbance (ou transmittance) qui dépend de la concentration (cf loi de Beer-Lambert, si tu ne te souviens plus). Pour la spectro par fluorescence : plus tu as de molécules fluorescentes (florophores), plus l'intensité du rayonnement émis lors de la désexcitation de florescence sera grande. Pour l'HPLC, c'est le même principe que toute chromatographie : une molécule donnée est éluée pendant une durée donnée. Cette vitesse de migration dépend du type d'appareillage utilisé (type de colonne), du solvant utilisé pour l'élution (notamment polarité, affinité solvant/molécule à éluer), mais aussi bien sûr du type de molécule que tu utilises. Cependant, si tu augmentes la concentration, ce qui variera c'est la surface sous le pic d'élution (intégration du pic).

Tout compris pour la première question ?

[invite24e14f50]

oui oui, c'est très clair! merci

[invite24e14f50]

quelqu'un pourrait t-il m'aider pour les autres questions?

[ArtAttack]

Pour la 2 tu as trouvé la réponse (filtre interne).
Je rappelle juste qu'on est pas là pour faire des exercices, mais pour aider.

[invite24e14f50]

Désolée si j'ai été trop impatiente s:

[moco]

§ 2: Dans certaines conditions operatoires, en fluorescence, on peut observer une augmentation du signal lors d'une dilution de la solution. Expliquez ce phénomène. (je crois qu'il s'agit du phénomène de filtre interne, mais a quoi est il du?)
Si 1000 molécules fluorescentes sont frappées par 1000 photons, elles ne réémettent jamais 1000 photons de fluorescence, car le rendement de fluorescence n'est jamais 100%. Une partie de l'énergie est perdu en chaleur. Donc elles réémettent peut-être 800 photons. Si la solution est très diluée, ces photons sortent de la solution et sont détectés. Mais si la solution est concentrée, une partie ou la totalité de ces photons est réabsorbée par les molécules du voisinage. Admettons que la moitié (400) de ces photons sont réabsorbés, et que 80%. donc 320 soient réémis, Le signal total sera 400 + 320 = 720. Ce n'est pas 800 photons. Et cela peut être pire, car les 320 photons réémis par les molécules du voisinage peuvent à leur tour être réabsorbés, et réémis avec un rendement de 80%, etc. Ce phénomène de quanching, ou de filtre interne, est d'autant plus important que la csolution est concentrée.

question 3: expliquez pourquoi le dosage par fluorescence implique des concentrations en analyte significativement plus faibles qu'en spectrophotometrie uv-visible? Quels sont donc les avantages et inconvénients du dosage par fluorescence en comparaison avec l'uV-visible et la CLHP?
Le dosage par spectro UV implique une différence, ou un rapport entre l'intensité d'un signal entrant et le signal sortant de la cellule de mesure.. S'il y a très peu de molécules absorbantes, le signal I sortant de la cellule est presque égal au signal initial I_o, selon la loi de Lambert-Beer. Si I = 0.999 I_o, tu ne peux pas prétendre faire une mesure valable.
Le dosage par fluorescence implique une mesure absolue. On mesure l'intensité émise dans le rouge quand on éclaire avec du bleu. Le signal d'excitation ne perturbe pas le signal d'émission. Le moindre photon rouge émis se détecte, même s'il y a beaucoup de lumière bleue qui excite le tout.

D'apres la pharmacopée européenne, une solution de chlorhydrate de quinine dans l'acide sulfurique dilué exposée a la lumier ultraviolette à 366 nm possede une fluorescence bleue qui disparait presque completement par addition d'acide chlorhydrique concentré.

question 4: expliquez pourquoi la fluorescence est atténuée par l'ajout d'acide chlorhydrique concentré.
la quinine est une base. Elle contient un atome d'azote N pourvu un doublet non liant. Ce doublet est essentiel pour l'émission de fluorescence. Quand on ajoute une solution acide, ce doublet est utilisé pour fixer un proton. Il devient liant entre N et H. La fluorescence est détruite.

on sait par ailleurs que la quinine possede trois maxima d'absorption (250,317, et 348 nm), dont celui de 250 nm est le plus intense

question 5: pourquoi n'utilise t'on pas le maximum d'absorption a 250 nm pour l'excitation de la fluorescence? ( il me semble que c'est parce qu'a 250 nm on obtient un spectre d'intensité plus bruité a cause de la photodegradation, mais pourquoi? et qu'est ce que la photodegradation exactement?)

Les photons de 250 nm sont plus énergiques que ceux de 317 et de 348 nm. Ils peuvent donc plus facilement casser des liaisons, donc détruire la molécule qu'on veut analyser.

pour la mise en evidence des autres alcaloides du quinquina, la pharmacopée propose une chromatographie liquide CLHP sur une colonne octadécylsilylée en utilisant une phase mobile tampon phosphate ph 2.8 avec 6% d'acetonitrile

question 6:expliquez brievement le role des constituants de la phase mobile: acetonitrile, eau, phosphate monopotassique, acide phosphorique.

L'acide et le phosphate monopotassique forme un mélange tampon qui fixe le pH. L'eau dissout ces constituants.

question 7: pourrait on maintenir le meme pourcentae de solvant organique si on utilise un tampon pH 7.0, expliquez.

Non: A pH 7, l'acide H₃PO4 est transformé en ions H₂PO₄^- et HPO₄^2-. Peut-être que le mélange eau et acétonitrile ne dissout pas bien ces ions. Je n'en sais rien, mais c'est probable.

[invite24e14f50]

Merci beaucoup beaucoup! (-: