HPLC : Principe et exploitation

[inviteea5e2ede]

Bonjour ! Merci de passer par là, tout d'abord :

J'ai fais l'analyse HPLC d'un liquide que je savais contenant des carbones et hydrogènes.
Toutefois, j'ai peur d'avoir mal compris le principe de cette méthode d'analyse :

Voici ce que j'en ai compris :

- On rentre l’échantillon
- L'éluant l’entraîne plus ou moins, suivant la polarité des molécules : un éluant polaire entraînera mieux les molécules polaires, qui sortiront donc plus vite.
- On compare les temps de sortie avec ceux des solutions tabulées.

J'obtient ceci, en comparant avec "C8 C9 C10 C11 C12" (En haut mon composé, en bas les carbones tabulés)

### lien supprimé

J'aimerais en conclure que mon composé contient des hydrocarbures avec entre 8 et 11 carbones (Si j'ai bien compris)


Toutefois, je ne comprend pas 2-3 aspects :

- Les chaines carbonées sont très peu polaires, comment comparer deux chaines avec 1 ou deux carbones de plus ou moins ? Quel est l'ordre de grandeur de la différence de polarité si tel est le cas ?
- A quoi sert la phase stationnaire ? Elle semble retenir plus ou moins les composés, peut etre pour "garder" les composés apolaires ?

Merci d'avance !
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[JPL]

Les images doivent être postées en pièces jointes et non sur un serveur extérieur.

[inviteea5e2ede]

Désolé :
Je reposte donc avec l'image de l'analyse :


(En haut mon composé, en bas les carbones tabulés)

[sfnsfn2]

on voit que certains composés existent (en comparant leurs temps de rétention: superposition) et entre chaque hydrocarbure (entre C8 et C9) il y a des pics dans ton échantillon
on rencontre ça dans l'analyse d'une coupe pétrolienne, peut etre c'est des hydrocarbures ramifiés
la ramification rend le composé plus volatil
donc avant le pic de C8 il n'y a rien
avant le C9 il existe, on peut trouver par exemple du méthyloctane
ainsi de suite pour les autres

[A voir en vidéo sur Futura]

[inviteea5e2ede]

Merci pour la reponse !

L'HPLC joue donc sur la volatilité des composés ? Plus lourd = moins volatil donc ?

[JPL]

En HPLC la volatilité n'a rien à voir. Les molécules s'adsorbent sur la phase de la colonne et sont progressivement entraînées par l'éluant en fonction de leur degré de rétention. Ici c'est certaiement une colonne en phase inverse et les molécules sortent en fonction de leur caractère apolaire, les plus apolaires (les chaînes les plus longues) sortant en dernier.

[inviteea5e2ede]

Ah, ma comprehension initiale n'est donc pas si eloignée : mais les carbones sont très peu polaires, en rajouter un sur une chaine change tant de choses ?

[JPL]

Tu ne rajoutes pas simplement un carbone tu rajoutes H-C-H. Il est bien connu que l’hydrophobie des hydrocarbures augmente avec la longueur de la chaîne.

[sfnsfn2]

En HPLC la volatilité n'a rien à voir. Les molécules s'adsorbent sur la phase de la colonne et sont progressivement entraînées par l'éluant en fonction de leur degré de rétention. Ici c'est certaiement une colonne en phase inverse et les molécules sortent en fonction de leur caractère apolaire, les plus apolaires (les chaînes les plus longues) sortant en dernier.

tout à fait juste
j'étais tres pressé et j'ai pensé à l'analyse d'une coupe pétrolienne par CPG où on utilise les indice de rétention (on trace logtr en fonction du n, n nombre d'atome de carbone)
après j'ai déconnecté
mais dans ma tete j'ai dis que le mot HPLC apparait dans la discussion donc il faut revoir mon message
merci pour la remarque

l'analyse des hydrocarbures est plus facile par CPG que HPLC
il n'y a pas de volatilité en chromatographie liquide, le type d'interaction est différent (adsorption , partage ...)
surement que le mode utilisé est la phase normale ou peut etre une phase inverse non aqueuse
donc, lorsque la chaine carbonique augmente (il y a un CH2 entre chaque alcane qui se suit), le caractère apolaire augmente ce qui diminue/augmente le temps de rétention

d'apres le chromatogramme, l'ordre d'élution indiqué est C8-C12, lorsque le nombre de carbone augmente le temps de rétention augmente ce qui signifie une plus forte interaction soluté-phase stationnaire (interaction hydrophobique)

- Les chaines carbonées sont très peu polaires,

dans les hydrocarbures, il ya des atomes de carbones et d'hydrogènes seulement, la différence d'électronégativité entre C et H est faible ce qui donne une liaison covalent et un moment dipolaire nul

comment comparer deux chaines avec 1 ou deux carbones de plus ou moins ?

plus le nombre de carbone augmente, plus le caractère apolaire augmente (la solubilité dans l'eau diminue)

- A quoi sert la phase stationnaire ?

elle sert à separer un mélange en fonction de interaction soluté-phase stationnaire

[inviteea5e2ede]

donc, lorsque la chaine carbonique augmente (il y a un CH2 entre chaque alcane qui se suit), le caractère apolaire augmente ce qui diminue/augmente le temps de rétention

dans les hydrocarbures, il ya des atomes de carbones et d'hydrogènes seulement, la différence d'électronégativité entre C et H est faible ce qui donne une liaison covalent et un moment dipolaire nul

plus le nombre de carbone augmente, plus le caractère apolaire augmente (la solubilité dans l'eau diminue)

elle sert à separer un mélange en fonction de interaction soluté-phase stationnaire

Je crois avoir compris, merci à tous les deux !
Pour le principe de l'HPLC c'est compris,
Qui se ressemble s'assemble, la phase stationnaire retient telle polarité tandis que la phase mobile entraîne l'autre polarité...


Mon dernier problème doit provenir des définitions :

Molécule avec un moment dipolaire nul, molécule équilibrée en charge = apolaire

Dans ce cas, comment définir "plus" ou "moins" apolaire : si le moment est nul, il ne peut être "plus" ou "moins" nul ?
Une molecule avec un très faible moment dipolaire est automatiquement polaire, donc...

Autant je compend le "plus" ou "moins" polaire, si le moment est plus ou moins grand, mais apolaire...

[sfnsfn2]

pour comparer la polarité des composés on utilise une constante appelée logP (coefficient de partage eau-octanol)
sachant que les composés polaires sont soluble dans l'eau et selon cette solubilité le caractère polaire augmente ou diminue
on trouve cette constante dans les logiciel tel que ACDlab

[JPL]

En fait c'est plutôt pour comparer (empiriquement) la liposolubilité des molécules.

[inviteea5e2ede]

Et donc, plus la molécule serait soluble dans l'eau, plus vite elle ressortirait ?

[JPL]

Oui

[inviteea5e2ede]

D'accord ! =D

Merci beaucoup pour les précisions !