Bonjour,
je vous écris car j'ai besoin d'aide. Cela fait à peu près un mois que je planche sur une méthode afin de quantifier la lysine et l'arginine en HPLC-MS (nous avons un détecteur QDA).
J'ai testé deux types de méthodes: une avec une colonne Hydro RP18 et un éluant Eau+0.3% acide heptafluorobutyrique 75% / Méthanol+0.3% acide heptafulorobutyrique 25%. et une autre méthode avec un colonne C18 et un éluant Eau+0.1% acide formique 75% / ACN+0.3% acide formique 25%.
Mon problème est que dans le 1er cas, j'obtiens de très jolis pics, séparés (même si en HPLC_MS le temps de rétention compte peu vu qu'on lit à la masse 147 pour la lysine et 175 pour l'arginine), mais les surfaces ne sont pas répétables d'une sequence à l'autre, d'un jour à l'autre. Je suis incapable de dire pourquoi mais elles évoluent.
Du coup on est passé à la 2ème méthode où l'on obtient de jolis pics pas vraiment séparés mais pareil aucune répétabilité ne fonctionne, les surfaces augmentent au fur et à mesure des injections.
Le QDA est un nouvel appareil que nous avons et que nous ne maitrisons pas encore totalement je me demande donc si les paramètres de l'appareil sont les bons? Où alors un isntabilité de mes surfaces ne vient elle pas plutot des conditions chromatographique?
Bref j'ai l'impression d'avoir tout testé mais je ne comprend pas pourquoi les surfaces ne sont pas répétables.
Nous n'avons pas de fluorimètre, je vous demande donc si vous connaissez une méthode d'analyse de la lysine et de l'arginine soit par spectromètre de masse, soit par détecteur UV qui fonctionne?
Ou si vous avez une idée de ce qu'il faudrait changer dans ma méthode pour que cela soit stable?
Je vous remercie d'avance pour votre aide et attend vos réponses avec impatience.
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