Chromatographie en phase liquide sur colonne

[invited16dd071]

Bonsoir,
Dans ce type de chromato (mentionné dans le titre), y a t-il plusieurs types ou seulement l’HPLC? Ou es ce que c’est le type le plus important? J’ai fait quelques recherches mais je n’ai pas trouvé grand chose.
Merci d’avance.
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[moco]

La chromatographie liquide sur colonne se pratique surtout à pression ordinaire. C'est la plus ancienne méthode et probablement la plus souvent utilisée, car elle ne nécessite aucun appareillage sophistiqué. On prend un simple tube de verre vertical, terminé en bas par un robinet, comme pour une burette. On remplit une partie du tube avec un liquide, qui peut être de l'eau ou un solvant organique. L'important, c'est que ce liquide soit un corps pur. On ajoute ensuite de la poudre de silice ou d'alumine, ou d'une autre substance insoluble qui s'amasse au fond du tube. Il faut que la poudre soit toujours recouverte de liquide. On laisse s'écouler le liquide par le robinet, et on remplace le liquide ainsi recueilli, en rajoutant du solvant frais. On doit faire attention à éliminer les bulles d'air, et ce n'est pas facile. Quand c'est fait, on ferme le robinet, et la colonne est prête à l'emploi. On verse alors 1 ou 2 mL de la solution à analyser, et on ouvre le robinet. Le liquide pénètre dans la colonne. On continue ensuite à ajouter du solvant frais pour que la colonne soit toujours recouverte de solvant. On voit peu à peu les constituants de la solution se séparer. Si par exemple, on avait introduit un extrait d'épinard dans l'acétone, on voit la chlorophylle verte se séparer et avancer à vitesse différente par rapport à la xanthophylle jaune, en progressant à travers la colonne. On peut ainsi séparer les constituants d'un mélange.

[Kemiste]

Bonsoir.

Au labo les choses sont un peu différentes. On fait rarement ce type de colonne à pression ordinaire. La séparation se fait sous une légère pression, obtenue avec de l'air comprimée. L'éluant est rarement un corps pur. En général on utilise un mélange de solvants : un solvant apolaire et un solvant polaire. Au cours de la purification on peut être amené a augmenter la proportion en solvant polaire afin de séparer tous les constituants du mélange.

[chermoun]

Bonsoir,
d'aprés la CCM j'ai un mélange qui contient deux produits presque superposable ( trés proche entre eux), en eluant avec différente solvants avec differents poucentage je n'arrive pas à les séparer, j'ai travaillé avec acetate d'éthyle ether de ptrole, ether methanole, dichlorométhane, THF, a savoir qu'il s'agit de deux isomères qui contienent chaqun deux ester comme fonction, si quelqun a une proposition je serais reconnaissant.

[A voir en vidéo sur Futura]