pH pour CCM

[invited3ec7b59]

Bonjour, je passe mercredi à mon oral de TPE

Notre expérience est une hydrolyse de l'aspartame suivie d'une chromatographie.

Lors de l'hydrolyse de l'aspartame, nous avons ajouté de l'hydrogénocarbonate de sodium jusqu'à la fin de l'effervescence. J'ai cru comprendre que l'hydrogénocarbonate de sodium permettait de neutraliser la solution acide pour permettre la chromatographie.

Mais pourquoi est-il nécéessaire d'avoir un pH basique ou neutre pour faire la CCM ? Ne peut on pas le faire avec un pH acide ?
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[Strade]

Bonjour mcmaxyt,

Il me semble qu'un pH basique est nécessaire afin de s'assurer que les goupements amine soient bien sous forme -NH2. Ceci permet la réaction avec la ninhydrine, qui sera ton révélateur en CCM.

[invited3ec7b59]

Merci beaucoup pour votre réponse.

J'ai creusé un peu cette piste et je suis tombé sur le pHi (potentiel hydrogène isoélectrique). Est ce que le pHi est lié à mon cas.

Avez vous d'autres informations sur le pHi

Cordialement

[Strade]

Rebonjour,

Le point isoélectrique d'un acide aminé ou d'une protéine correspond au pH auquel la molécule est électriquement neutre. Dès lors, on peut se retrouver, au point isoélectrique, avec des molécules possédant une fonction amine protonée (ammonium), ce qui n'est pas ce qu'on cherche ici. De plus, les pI de l'acide aspartique et de la phénylalanine (les deux acides aminés qui composent l'aspartame) sont en-dessous de 7 (environ 3 et 5,5, si mes souvenirs sont bons) !

Etant donné qu'on cherche à avoir une molécule avec une fonction amine non protonée, il faudra plutôt se tourner vers le pKa de ces fonctions. De manière générale, un pH supérieur à 10 permet la déprotonation totale de la plupart des groupements amine d'un acide aminé.

[A voir en vidéo sur Futura]

[invited3ec7b59]

Bonjour,

Merci de votre réponse.

Comment pourrait-on alors expliquer pourquoi le pH doit etre basique pour que les fonctions amines soient non-protonnées ?

Merci de votre aide !

[Strade]

Ceci est tout simplement lié à la constante d'acidité du résidu. Les groupements amine sont généralement basiques, ce qui veut dire qu'à un pH bas, ils ont tendance à capter les protons du milieu pour devenir des groupements ammonium. Ce que l'on cherche ici, c'est exactement l'inverse ! On va donc chercher à garder le milieu basique pour que ces résidus restent sous la forme -NH2.

[tb01]

Bonjour à tous

La CCM est une chromatographie qui joue sur la polarités des molécules ( leurs charges partielles )et non leurs ionisation.
L'étude des pKa et de l'état d'ionisation est uniquement "utile" pour des chromatographie sur gel d'acrylamide ou d’agar qui nécessite un champ Electrique pour faire migrer les molécules.

qu'en pensez vous?

[Kemiste]

Bonjour.

La CCM est une chromatographie qui joue sur la polarités des molécules ( leurs charges partielles )et non leurs ionisation.
L'étude des pKa et de l'état d'ionisation est uniquement "utile" pour des chromatographie sur gel d'acrylamide ou d’agar qui nécessite un champ Electrique pour faire migrer les molécules.

Si tu fais une CCM en phase normale tu auras beaucoup de mal à faire migrer les espèces chargées qui resterons en bas de la plaque (cas des amines protonées par exemple). Au contraire, en phase inverse les espèces chargées auront tendance à migrer plus vite. Le pH a donc également son importance en CCM.