SPPS - Clivage avec Cocktail K

[tetrakis49]

Bonjour,

Je réalise des clivage de petites peptide de leur résine (résine de Wang) avec du cocktail K (TFA, Thioanisole, éthanedithiol, phénol, eau).
Une fois le clivage réalisé, je suis censée concentrer les jus (dc le cocktail K contenant mon peptide) sous vide. Cependant, parfois, je suis dans l'impossibilité de concentrer, rien ne distille !! Je ne comprends pas, je suis sur des vides d'environ 10 mbars, avec un bain à 55°C, le TFA a un point d'ébullition de 72°C, cela devrait évaporer.

Parmi ceux qui font de la synthèse peptidique sur support solide, y en a t'il qui ont aussi ce pb?

Je vous remercie.
-----

[vpharmaco]

Bizarre, car cela part bien au rotavap à 40C.
Autrement, je n'utilise que très rarement le rotavap pour éliminer le TFA car les vapeurs peuvent abimer les pompes. Le TFA sévapore facilement en faisant passer un léger courant d'azote à la surface de ta solution (on a vite fait d'évaporer 10 mL en 20-30 min). (A réaliser sous hotte bien évidemment !).
Le peu de TFA résiduel restant à la fin n'empêche habituellement pas la précipitation après l'ajout d'un volume suffisant d'éther.

[tetrakis49]

Je vous remercie de votre réponse. ce phénomène n'est pas systématique, des fois j'arrive à évaporer, d'autres fois non. Je me demande si parfois, je ne forme pas une sorte de complexe avec mon peptide qui devient alors inévaporable?

Autre question: mes peptides sont floconneux, j'ai beaucoup de mal à les filtrer, ils ont tendance à se liquéfier, surtout si je ne filtre pas sous azote ? Des solutions ?

[vpharmaco]

Je vous remercie de votre réponse. ce phénomène n'est pas systématique, des fois j'arrive à évaporer, d'autres fois non. Je me demande si parfois, je ne forme pas une sorte de complexe avec mon peptide qui devient alors inévaporable?

C'est possible. Cela vaut le coup tout de même je pense de tenter l'évaporation sous un courant d'azote (à effectuer dans un tube à centrifugation ou un tube à essai, pas de un ballon avec un petit rodage).

Autre question: mes peptides sont floconneux, j'ai beaucoup de mal à les filtrer, ils ont tendance à se liquéfier, surtout si je ne filtre pas sous azote ? Des solutions ?

Tu parles de la filtration après précipitation dans l'éther ? Si oui, je n'ai jamais filtré un peptide Notre protocole standard est de récuperer le filtrat après clivage dans un tube à centrifugation (Falcon), évaporer la majeure partie du TFA, ajouter l'éther et isoler le peptide par centrifugation (4000 rpm, 3-5 min, à 4°C si la centri est réfrigérée). Le surnageant est éliminé. On répète l'opération 2x avec de l'éther.
Après le dernier lavage, le précipité est séché au dessicateur sur la nuit puis purifié par HPLC.

[A voir en vidéo sur Futura]