Répondre à la discussion
Affichage des résultats 1 à 3 sur 3

Distance de migration sur gel et poids moléculaire




  1. #1
    Lunev

    Distance de migration sur gel et poids moléculaire

    Bonjour à tous,

    J'ai quelques soucis pour la rédaction d'un rapport de biochimie.

    Pour faire court, l'expérience consistait à insérer un fragment d'ADN étranger dans un plasmide pCR II, digérer ce plasmide à l'aide des enzymes de restriction EcoRI et XhoI puis de visualiser le résultat par électrophorèse.
    On fait de même avec un plasmide non recombinant (qui n'a pas incorporé l'ADN étranger).

    Bref au final on se retrouve avec une jolie photo de notre gel d'agarose et on doit tracer une droite "de référence" qui, je suppose, est la droite de la distance parcourue par le fragment d'ADN en fonction de son poids moléculaire, donner la taille et la distance parcourue par les différents fragments et faire les cartes de restriction des deux plasmides. Jusque là, rien de bien compliqué en apparence.

    La photo de notre gel d'agarose nous a été envoyée et est en pièce jointe de ce message.

    Le puits 9 est sensé être l'échelle de poids moléculaire (on y a mis le marqueur NEB 2log), seulement celle-ci n'est pas complète.
    Mon problème est donc : comment savoir quel fragment correspond à quel poids moléculaire sur cette échelle?

    En fouillant sur le net, il est dit par les fabricants qu'il y a trois bandes "repères" qui sont plus accentuées. À mon avis, on en voit une et ce serait la 4ème du puits 9. Mais comment savoir si c'est celle qui est de 3kb, de 1kb ou de 0,5kb?

    Cette simple information manquante m'empêche de faire tout le reste, c'est plutôt frustrant...
    J'espère que quelqu'un aura un début de piste ~~'

    -----

    Images attachées Images attachées

  2. #2
    Yoyo

    Re : Distance de migration sur gel et poids moléculaire

    Salut

    ton gel a beaucoup trop migré d'ou l'absence des bandes. De plus ton bleu masque les bandes les plus hautes.
    CEci etant dit tu peux t'en sortir en sachant que le plasmid PCRII fait 4kb or ca correspond pile poil a la bande supérieure a celle qui est tres intense.
    Donc celle qui est intense est bien a 3kb.

    Yoyo

  3. #3
    Lunev

    Re : Distance de migration sur gel et poids moléculaire

    Merci, je pense que c'est pile ce qu'il me fallait, et bêtement j'ai oublié de prendre en compte le nombre de bases du plasmide... Panique, quand tu nous tiens...!


Discussions similaires

  1. [Biologie Moléculaire] TBE et gel de migration
    Par sonika dans le forum Biologie
    Réponses: 13
    Dernier message: 16/01/2010, 01h15
  2. [Biologie Moléculaire] probléme de migration d'ADN sur gel d'agarose
    Par Timetomove dans le forum Biologie
    Réponses: 3
    Dernier message: 13/05/2009, 14h34
  3. [Biologie Moléculaire] problème migration ARN gel agarose
    Par FELIXIA dans le forum Biologie
    Réponses: 15
    Dernier message: 24/01/2008, 07h46
  4. [Biochimie] Problème de migration de gel
    Par Wallas dans le forum Biologie
    Réponses: 28
    Dernier message: 11/09/2007, 12h01
  5. problème d'analyse de gel de migration
    Par bapu dans le forum Biologie
    Réponses: 8
    Dernier message: 12/04/2007, 18h16