Bonjour,
je viens de faire un exercice et je voulais savoir si il était juste.
j'ai du mal avec les unités donc c'est surtout la fin de l'exercice sur lequel je bloque (calcul du Kcat)

merci
voici l'énoncé

Les hydrocarbures chlorés sont des polluants, nous étudions leur biodégradation.
Ils ont transformée par des bactéries méthanotrophes qui utilise l'oxydation du méthane pour leur croissance.
la premiere etape d'oxydation est catalysée par une méthane monooxygenase capable d'oxyder le dichlorométhane.

1.Pour déterminer les meilleures conditions de culture d'un de ces organismes la vitesse de fonctionnement de l'enzyme a été étudiée en fonction de la concentration en méthane.
les resultats sont obtenues avec les représentation v= f(S) et S/v =f(S) indiquent que l'enzyme obéit au modèle de Michaélis et Menten.
Les vitesse sont mesurées en nmoles.min et les concentrations en substrat varient de 0 à 100µM.

a.sachant que S/v = 0.008x S +0.18
Quelles sont les valeurs de Km et Vm ?

Il s'agit de la représentation de Hanes dont l"équation est


On identifie:
1/Vm= 0.08 donc Vm= 12.5nmoles.min

et Km/Vm= 0.18 donc Km= 12.5x 0.18= 2.25µM

2.En présence de 20µM d'un composé X on constate que le Km apparent est diminué de 13% par rapport au Km.

Proposé un schéma réactionnel qui permette d'expliquer ces resultats (vous préciserez les différentes formes sous lesquelles l'enzyme apparait)

Le Km apparent diminue en présence du composé X donc l'affinité enzyme substrat diminue le type est compétitif

Le schéma est alors E+S <---->ES ---->E+P
+I <------> EI
b. Determiner l'équation de vitesse
après demonstration:

v= (Vm .S) / S+Km (1+I/Ki)

Calculer Ki ainsi et determiner les constantes cinétiques apparentes
Km est diminué de 13% donc Km apparent vaut:
(1-0.13)xKm= 0.87x22.5= 19.58µM

Km app = Km (1+X/Kx)

Kx= [(Km/Km app)-1] x20= 2.99µM

Vmapp= Vm =12.5nmoles.min

Une enzyme a une masse moléculaire de 63158g.mol-1
son activité spécifique est de 76µmoles.min-1.mg-1
et la masse d'enzyme est de 0.8µg

Calculer Vm en moles.min-1
Vm=ASx masse= 76µmoles.min-1.mg-1 x 0.8µg = 60800µmoles.min

Calculer l'activité moléculaire et determiner Kcat .
AM= ASx M=76µmoles.min-1.mg-1x 63158g.mol-1= 4800min