[Bio Moléculaire] Extraction de l'ADN d'oignon

[PoeciliaReticulata]

Bonjour,

Je viens de rentrer en L1 biologie et j'en suis à ma première semaine, qui consiste à une ouverture scientifique (ça tombe bien pour moi car je sors de TL !)
Pour l'instant je suis assez content, j'ai compris toutes les matières. Sauf Bio Moléculaire.


En effet, nous avons fait un TP qui avait pour but d'extraire et de mettre en évidence l'ADN d'oignon par des "techniques et des réactifs simples".

On avait donc à notre disposition:
- un mixeur broyeur
- bacs à glace
- un bain-marie à 60°C
- un entonnoir
- NaCl (sel)
- une solution mère d'EDTA 0,5 M
- une solution mère de SDS à 5%
- éthanol à 95%, glacé
- oignon
- tubes de 50 mL
- un thermomètre
- une balance


Il fallait préparer la solution de lyse et d'homogénéisation (c'est ce qu'il y a marqué mais j'ai du mal à comprendre ce que ça signifie ???) avec les concentrations finales suivantes: EDTA 0,1 M, SDS à 1% et NaCL 0,15 M

Pour cela il fallait déterminer "le volume du tampon de lyse nécessaire à l'extraction, puis calculer les volumes à ajouter à partir des solutions-mères EDTA (0,5M), SDS 5%, et la quantité de NaCl en sachant que la masse moléculaire de NaCl est de 58,44 g/mol"



Avant tout, je voudrais préciser que ce n'est pas un devoir à faire, ce n'est pas quelque chose de noté ou à rendre, c'est un TP qu'on avait à faire en classe, c'était juste pour nous initier un peu à ce qu'on allait faire au premier semestre en bio moléculaire.
Si je vous adresse ce message c'est donc par curiosité scientifique, je suis juste un pauvre L qui doit travailler un peu plus que les autres en bio lol.


N'ayant pas compris en cours comment déterminer les volumes à ajouter à partir des solutions-mères (d'EDTA, SDS et NaCl), je me suis dit que j'allais relire mon TP chez moi et que je comprendrai mieux. Or, j'y ai réfléchit environ 2h et je n'ai toujours pas compris.


Ca serait vraiment sympa si quelqu'un pourrait m'aider à comprendre ça.
Parce que je connais la formule M = m/n, mais avec ça je ne sais pas trop quoi faire...

Et la prof nous a dit que c'est N-E-C-E-S-S-A-I-R-E de comprendre ce TP pour la biologie moléculaire.


Merci d'avance, un L qui ne demande qu'à devenir scientifique (la bio m'intéresse énormément et j'ai peur d'échouer à cause de mon manque de connaissance scientifique), lol.
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[Enaïtso_22]

Bonsoir,

Alors déjà pour répondre (en partie) à ta 1ère question, un tampon de lyse et d'homogénéisation va permettre la lyse cellulaire (la destruction de la cellule si tu préfères ), ce qui permet de récupérer l'ADN (je suppose que vous avez broyé l'oignon dans le tampon et que vous avez filtré après ?) et de le protéger des enzymes qui le détruiraient (les endonucléases) grâce à l'EDTA. Je sais plus à quoi sert le SDS Je dirais que le NaCl permet de rester à pH physio encore que je vois pas trop l'intérêt là ....

Pour prévoir le volume de solution tampon, je vois pas trop comment faire, mais je peux te donner quelques éléments de réponses sur la façon de déterminer la quantité de réactifs à prélever

Pour NaCl, tu utilises effectivement la formule M=m/n. C'est m, la masse à peser que tu cherches. Tu as donc la formule m=n.M. n c'est le nombre de moles que tu veux de NaCL. Pour l'obtenir, tu utilises la formule n=C.V (C : concentration molaire (ici C=0.15) et V le volume de la solution). M est la masse molaire de NaCl (58.44 g.mol-1). Tu as donc en formule finale m=C.V.M.

Pour les solutions, il y a une formule magique C1.V1=C2.V2
C1 : Concentration initiale
V1 : Volume de solution mère à prélever
C2 : Concentration finale
V2 : Volume final
Tu obtiens donc V1 = (C2.V2)/C1
Normalement si tu applique cette formule pour chaque solution, tu ne peux pas te tromper
Il faut juste faire attention aux UNITÉS !!! C'est le meilleur moyen de se planter d'un facteur 10, 100 ou 1000 !!

Et sinon, si tu apprends bien (les connaître et les appliquer, sinon c'est pas drôle) ces quelques formules principalement, tu devrais pouvoir t'en sortir sans trop de problème même si tu sors de L Je suis pas particulièrement douée en maths ou en physique (loin de là ^^) mais je m'en sors avec ces formules et ça m'a pas empêché d'arriver en L3 bio

Voilà, je pense que tu as déjà de quoi te triturer un peu le neurone ^^ Si tu as d'autres questions n'hésite pas