Biologie Moléculaire : Extraction de l'ADN plasmidique

[invite39ca6ceb]

Bonjour,
J'aimerais avoir des informations concernant la démarche habituelle pour préparer des bactéries à une extraction de leur ADN plasmidique.
Ces informations concernent les réactions chimiques entrainées par chacun de réactifs introduits...

Des références explicites à des sources bibliographiques sont vivement souhaitées.

J'ai cherché a la bibliothèque de mon université et sur les différents sites web consacrés mais je n'ai pas trouvé un dossier complet avec une description "réellement" scientifique des événements entraînée par les divers mélanges de solutions.

A quoi sert :

- Dans la solution de resuspension : EDTA (10mM), Tris-HCl (50mM), RNAse A (100mg/mL), Ph 8,0.

- Dans la solution lyse : NaOH (200mM) et SDS (0,1%)

J'ai trouvé différentes utilisations de ces molécules mais aucune ne me semble correspondre exactement à ce protocole.


Merci de votre attention,
enZ0

ps : J'ai peur de m'être mal exprimé, je souhaite comprendre les réactions chimiques entrainées par chacun de ces éléments (je sais déjà a quoi sert une solution de resuspension ou de lyse, je cherche a comprendre comment elles fonctionnent à l'échelle moléculaire).
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[invite160a5434]

Bonjour a toi.

Je ne suis pas sur de ce que je vais te dire, il est vrai que ce sont des ingrédients couramment utilisés mais on y fait pas toujours attention, enfin pour ma part.

Il y a des choses pour lesquelles je ne pourrais pas te donner d'explication, puisque c'est déjà leur nom, j'entends par la le Tris HCl qui me semble entre une solution tampon.

La RNase A à la particularité d'etre particulièrement stable et donc si on fait bouillir un extrait cellulaire, on peut dénaturer toutes les autres enzymes sauf la RNase A. Or ici il y a un agent dénaturant, le SDS.

L'EDTA est un agent chélateur qui capture tout les ions bivalents comme le magnésium, calcium, zinc. Il permet donc la dissociation de certaines structures.

Enfin, NaOH, je pense que si tu dissocie ces deux molécules, tu as du OH- qui est une bonne base pour une catalyse générale basique.

Je pense qu'a partir de ça tu dois pouvoir confirmer mes dires par de rapides recherches.

Bonne chance.