lecture résultats southern blot

[invite8f7741d5]

Bonjour,
Je travaille pour mon TPE sur la thérapie génique et j'essaie de présenter en quoi la technique de southern blot peut permettre de détecter des mutations. J'ai bien compris la manière dont on procède jusqu'à l'envoi des sondes qui vont "s'accoupler" mais, malgré des heures de recherche et de lecture sur le net, je ne comprends encore pas bien comment on "lit" un résultat...
Est-ce que la sonde envoyée est un élément muté et qu'elle va aller reconnaître ce même élément muté? Sinon, comment met-elle en évidence des délétions ou des insertions par exemple? J'ai compris que la mutation va modifier la taille des fragments mais ...
J'ai beaucoup lu mais j'ai l'impression de ne rien comprendre aux résultats que la technique apport!
Un grand merci si vous pouvez m'aider!!!
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[invite765b88c7]

Bonjour,

voilà je pense que tu devrais aller chez Gilbert Jeune feuilletter un livre qui s'appelle bases cellulaires et moléculaires du développement, méthodes et exercices. Inutile de l'acheter, juste page 45 tu as exactement une application simple de cette technique. Il y a les réponses qui te seront utiles. Et surtout page 10-11 tu as une explication du Northern-Blot avec des dessins. C'est bien expliqué. Le southern et le Northern-Blot fonctionne de la même façon. Juste le Northern-Blot c'est pour l'ARN.

Au pire si tu ne comprend pas, chez Gibert, il y a toujours un livre super ou un étudiant sympas à proximité qui pourra te l'expliquer.

[invite57fcd3de]

On a besoin d'aide!!!! Vite c'est quoi le southern blot on comprend pas il faut nous expliquer s'il vous plait on est désespérées c'est urgent!!!!!! Expliquez nous simplement merci!!!!

[invite765b88c7]

Bonjour,
alors ma boîte mail à quelques problèmes donc désolé pour le retard. Le southern-blot s'oppose au northern-blot en quelque sorte. Le southern-blot c'est l'étude de l'ADN tandis que le northern-blot c'est l'étude de l'ARN. Je vous résume en gros mais allez voir wikipédia c'est pas mal: http://fr.wikipedia.org/wiki/Southern_blot

photos là: http://www.google.fr/imgres?imgurl=h...IIaxtAb24pC2Dw

Donc pour étudier la présence ou non d'un ADN particulier à un stade du développement de l'œuf d'amphibiens on fait un southern-blot.

Je pense qu'il y a des confusions avec l'hybridation in situ. Si vous aviez consulté l'ouvrage dont je vous ai parlé les résultats apparaissent sous forme de tâche pour un southern-blot.

Il y a plusieurs ADN extrait au départ (on a du sang ou autre donc c'est le bazar) donc on fait un max de purification pour ne travailler qu'avec l'ADN étudier.

Dans les premières "purification" on à l'hybridation in situ. Elle permet de travailler sur de l'ADN simple brin plus facile que l'ADN double brin. Et l'amplification de l'ADN à étudier. Si cette ADN est amplifier(= répliqué/copié plusieurs fois) il sera plus facile à étudier. Au cours des manipulation on perd de la matière et travailler sur beaucoup de fragments c'est mieux qu'un fragment.

Puis on fait une filtration sur gel:les ADN sont mis dans un gel et ils migrent selon leur taille dans des puits. Sachant que l'ADN étudier migre à 6 kDa on utilise une filtration sur gel qui comprend ce poids donc entre 9 et 8 kDa par exemple. C'est à dire que l'ADN est comme une bille et le gel c'est comme un labyrinthe. (kDa= kilo daltons c'est une unités.). Plus les billes sont lourde et plus elles sortent vite du gel. Mais plus les billes sont petites et plus elles restent longtemps dans le gel car elles sont retenus et la purification et donc plus importantes.

Après on fait une migration sur gel. D'où les tâches. Là c'est le southern-blot: on dépose les ADN qui obtenu précédemment sur une membrane de nitrocellulose. La migration se fait en parallèle de l'ADN témoin qui est étudié. A un certain moment on voit les 2 tâches coïncider. Donc on sait qu'au stade gastrula l'ADN existe mais pas au stade neurula par exemple.

On en conclu donc que cette ADN ne s'exprime plus après la transition blastuléenne par exemple. Et avec nos connaissances on peut extrapoler après.

A plus. Je suis occupé mais si vous avez d'autre question, n'hésitez pas. Et regarder des photos sur le web et le wiki.
( Bamh1, ECOR1 et autre ce sont des enzymes de restrictions.)

[A voir en vidéo sur Futura]