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Southern blot et séquençage - Interprétation

  1. Charles2A

    Date d'inscription
    août 2017
    Âge
    20
    Messages
    15

    Southern blot et séquençage - Interprétation

    Bonsoir à tous,
    Je suis en licence droit gestion et en parallèle je suis une licence de biologie à distance. Malheureusement les profs ne peuvent pas répondre à mes questions pendant ces vacances...

    Pourriez vous m'aiguiller sur la bonne voie dans cet exercice ci -dessous.

    " L’étude porte sur une portion du génome de deux enfants (individus 1 et 2) contenant un gène codant une enzyme importante dans le développement musculaire. L’individu 1 présente un taux d’activité enzymatique « normal ». Pour l'individu 2 qui est malade, l'activité enzymatique est toujours très faible. Un Southern blot a été effectué sur le génome des deux individus en utilisant comme sonde le gène entier codant l’enzyme (préalablement rendu simple brin) (Figure 1 ci-dessus). Les génomes ont été préalablement soumis à une digestion par l’enzyme Xho I. Le site de reconnaissance de l’enzyme de restriction Xho I est : C*TCGAG (* = site de coupure).
    La région d’intérêt a ensuite été séquencée par la méthode développée par M. Sanger (Figure 2, ci- dessous).
    Question 1 : Comment interprétez-vous le résultat de l'hybridation moléculaire de type Southern (Figure 2) ? "

    J'ai trouvé d'après les résultats du séquençage :
    Individu 1 :
    5' AAACTGCTCAGCTA 3'

    donc :
    3' TTTGACGAGTCGAT 5'

    Le brin matrice est donc :
    5' TAGCTGAGCAGTTT 3'

    De même pour l'individu 2 et on trouve le brin matrice : 5' TAGCTCGAGCAGTTT 3'

    On constate donc qu'il y a eu une mutation ponctuelle (insertion).

    Cependant je ne comprends pas la question 2 (positionner le site de restriction etc..)

    Question 2 : Traduisez la région d’intérêt pour les deux individus en commençant la lecture à la première base (Figure 2, NB : il s’agit du brin +), positionnez le site de restriction de Xho I sur la ou les séquence(s), donnez toutes les caractéristiques de l’événement mutationnel en affinant votre réponse de la question 1.


    Merci de votre aide éventuelle !

    Charles

    -----

     


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  2. ErmiteBelge

    Date d'inscription
    janvier 2016
    Messages
    23

    Re : Southern blot et séquençage - Interprétation

    Bonjour,
    Peux-tu mettres les différentes figures?
     

  3. Charles2A

    Date d'inscription
    août 2017
    Âge
    20
    Messages
    15

    Re : Southern blot et séquençage - Interprétation

    Bonsoir, le site n'accepte ni mes pdf ni mes png désolé... cependant je viens de m'apercevoir que j'avais fait une erreur.

    Erreur sur le brin matrice de l'individu 1 excusez-moi :

    **Individu 1 :
    AAACTGCTCTAGCTA
    D'où
    TTTGACGAGATCGAT

    Brin matrice (individu 1) :
    TAGCTAGAGCAGTTT

    Brin matrice (individu 2) :
    TAGCTCGAGCAGTTT

    La mutation est donc une transversion ! Je peux vous envoyer la photo par mail ?

    Charles
     

  4. Charles2A

    Date d'inscription
    août 2017
    Âge
    20
    Messages
    15

    Re : Southern blot et séquençage - Interprétation

    Citation Envoyé par ErmiteBelge Voir le message
    Bonjour,
    Peux-tu mettres les différentes figures?
    Bonsoir, (je n'arrive toujours pas à envoyer les photos) mais je pense avoir avancé :
    Le brin matrice pour l'individu 1(sain) est : 5' TAGCTAGAGCAGTTT 3'
    Pour l'individu 2 (malade), le brin matrice : 5' TAGCTCGAGCAGTTT 3'

    Or le site de restriction de l'enzyme Xho 1 est C*TCGAG (* = site de coupure)

    Et on remarque que la mutation (transversion) qui a transformé le A en C, a fait apparaitre le site de restriction de l'enzyme (CTCGAG) chez l'individu 2.

    Donc on peut en déduire que cette mutation a coupé au niveau de ce site le fragment d'ADN de l'individu 2, ce qui explique le mauvais fonctionnement de son activité enzymatique ?

    Vous pensez que c'est la réponse à la question 2 ?
     


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