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3' addition activity ???



  1. #1
    tardigrade

    Question 3' addition activity ???


    ------

    Bonjour a tous,

    quelqu'un sait il (meme approximativement) ce qu'est la 3' addition activity qu'on ne retrouve que chez :
    Taq DNA polymerase,
    Modified Taq DNA polymerase,
    Tth DNA polymerase.

    parce que je fais chou blanc depuis un moment....
    merci!

    -----

  2. Publicité
  3. #2
    -Lumière-

    Re : 3' addition activity ???

    Citation Envoyé par tardigrade Voir le message
    Bonjour a tous,

    quelqu'un sait il (meme approximativement) ce qu'est la 3' addition activity qu'on ne retrouve que chez :
    Taq DNA polymerase,
    Modified Taq DNA polymerase,
    Tth DNA polymerase.

    parce que je fais chou blanc depuis un moment....
    merci!
    salut...

    Les ADN polymérases, possèdent une activité terminale transférase sur une extrémité double brin (càd, ajout d’un nucléotide en 3’, qui est souvent le dATP). D’autre part elles possèdent aussi une activité 3’5’ exonucléase, qui conduira à l’élimination de ce nucléotide ; résultat, l’activité terminale transférase sera caché par l’activité 3’5’ exonucléase.

    Or, la Taq ADN pol, est dépourvus de l’activité 3’5’ exonucléase, se qui fait que l’activité terminale transférase sera visible. Les fragments d’ADN amplifiés par cette enzyme auront donc, dans l’une des extrémité, un A sortant [ = une extrémité franche, ce qui peut être exploiter pour le clonage dans un vecteur (avec un T sortant …) ]

    CCAAGGTGCGA 3’
    GGTTCCACGC 5’
    Activité terminale transférase

    A mon avis : 3’ addition activity n’est d’autre que cette activité terminale transférase, appelée aussi activité terminale désoxynucléotidyle transférase.
    Toucher la belle étoile c'est subsister

  4. #3
    Yoyo

    Re : 3' addition activity ???

    salut

    en effet je pense aussi que ca correspond a l'ajout de "A" a la fin du produit PCR ce qui rends le clonage "franc" impossible.

    Yoyo

  5. #4
    -Lumière-

    Re : 3' addition activity ???

    [ = une extrémité franche, ce qui peut être exploiter pour le clonage dans un vecteur (avec un T sortant …)]
    Autrement (pour qu'il n'y pas de confusion) :
    En absence du A, l’extrémité est franche, quand le A est présent l’extrémité générée est adhésive …
    A+
    Toucher la belle étoile c'est subsister

  6. #5
    tardigrade

    Re : 3' addition activity ???

    Apres une longue absence je vous remercie pour vos reponses!
    Depuis j'ai trouve (mais ce ne sont pas des scources absolument sur) que ce serait principalement un A ajoute, mais que les autres bases peuvent l'etre egalement.

    a+

  7. A voir en vidéo sur Futura

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