Milieu RIPA

[invitead282ff2]

Bonjour,
j'aurais aimé savoir l'utilité de chacun des composants du milieu RIPA (milieu de lyse).


Tris-Hcl 50mM ph=7.5
150mM NaCl
1% NP40
0.5% désoxycholate de sodium
EGTA 20 mM
DTT 1mM
Inhibiteur de protéases


Merci pour votre aide.

Morphine
-----

[piwi]

Tris-Hcl 50mM ph=7.5
150mM NaCl
1% NP40
0.5% désoxycholate de sodium
EGTA 20 mM
DTT 1mM
Inhibiteur de protéases

Les deux premiers déterminent la concentration saline du milieu, les deux suivants sont des détergeants, l'EGTA est un chelateur des cations divalents (Ca²⁺; Mg²⁺, ect...) ayant une forte affinité en particulier pour Ca²⁺ (meilleur que l'EDTA)
DTT permet de stabiliser les protéines possédants des groupements souffrés.

Cordialement,
piwi

[invite84b0382c]

Tris-Hcl 50mM ph=7.5
150mM NaCl
1% NP40
0.5% désoxycholate de sodium
EGTA 20 mM
DTT 1mM
Inhibiteur de protéases

Bonjour,

Le Tris-hcl et NaCl sont des tampon de milieu "classique"

le NP40 est un additif rajouté pour lyser tes cellules. Idem pour le DTT qui agit (je crois) sur les liaison sulfure des protéines.

Enfin le desoxycholate sert à la lyse cellulaire aussi (et apparemment plus particulièrement pour les bactéries)

Voilà ce que je peux te dire sur ce milieu.

j'espère que ca t'aidera

Akïn

L'inhibiteur de protéase doit surement te servir si tu souhaites récupérer tes protéines par la suite.

[invitead282ff2]

Merci à vous deux!


Je souhaite en effet récupérer les protéines ensuite.

Morphine

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite09d67ed7]

Bonsoir a tous, je fais remonter ce forum car je dois moi meme utiliser un tampon pour lyser mes embryons de zebrafish.

Je dois utiliser un tampon trouve dans un article : Lemeer et al. PLOS ONE July 2007

50 mM Tris pH7.5
150 mM NaCl
1mM sodium orthovanadate
1% NP-40
0.1% sodium deoxycholate
EDTA free protease inhibitor

J'ai bien compris le role de ces composants, malheureusement tous ne sont pas disponibles dans mon labo (il vient d'emmenager dans de nouveaux locaux dans un nouvel institut, donc tout n'est pas encore en place...).
Je ne dispose donc pas de sodium orthovanadate, de NP-40 ou de sodium deoxycholate... Pourriez-vous me dire si je peux m'en passer ou les remplacer par autre chose ?

Merci d'avance

Nanoushka !