miniprep ADN et RNase

[invite9ede8c9d]

Bonjour,

je souhaiterai avoir votre avis sur une manip:

J'ai fait une miniprep d'ADN sans mettre de Rnase A. Puis j'ai fais une digestion enzymatique.

Lorsque je regarde mon profil ADN après digestion il est exactement le meme que le non digéré . Sachant que le profil du non digéré n'est pas la taille que j'attendais (je vois certainement plusieurs formes de mon ADN).

De plus , en bas de mon gel j'ai une grande quantité d'ARN.

Est ce que les digestions peuvent être inhiber en présence de beaucoup trop d' ARN ?

L'ADN que j'ai sur mon gel, je ne pense pas que se soit un contaminant car j'ai fait 6 miniprep pour 2 plasmides différents or j'ai des profils différents pour les deux plasmides. Si cela avait été un contaminant j'aurai eu les memes profils.

Je vous remercie d'avance.

Stéphanie
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[invite02cefc91]

Pourquoi tu ne mets pas de RNase ? pour cela semble important, et je pense que ca pe jouer sur ta digestion enzymatique, moi je fé toujours mes miniprep avec de la RNase et ca marche toujours bien.

[invite9ede8c9d]

Ben je n en ai pas mis car je n en avais pas.. MAis bon vu que mes digestions ne fonctionnent pas je voulais savoir si c etait possible que ca vienne de là.. Du coup je pense que je vais en mettre
MErci

[invite02cefc91]

ben a mon avis c possible mais après cela depend pe ete du protocole utilisé.

[A voir en vidéo sur Futura]

[doubleD]

salut

J'ai jamais mis de Rnase et j'ai jamais eu de problèmespour mes digestions.

Ca c'est reproduit combien de fois ton problème?

[invite9ede8c9d]

J"ai fait 3 miniprep pour 2 plasmides en DH5 alpha.

Le résultat après digestion est que pour un plasmide j'obtiens un profil à 7000 et 3000pb alors que la deuxième bande devrait etre à 1000. Et pour le deuxième plasmide j'ai seulement une bande à 3000pb alors que je devrai avoir une seconde vers les 5000.

Or j'ai exactement le meme profil digéré et non digéré. ET le profil est différent entre les deux plasmides ce qui me laisse suggérer que cela ne vient pas d'une contamination.

Je ne comprends pas trop ...