Comment fait on pour isoler de l'ARNm codant pour la prolactine (protéine de sécrétion de l'hypophyse) ?
Merci d'avance pour vos réponse.
Je connais un peu les méthodes d'isolement de l'ADN mais pour l'ARN qui circule hors du noyau je ne sais pas comment faire.
Salut!
Bon alors le mieux c'est de lyser les cellules par les méthodes classiques, avec en plus un inhibiteur des RNases. Après tu fais une centri (10000rmp pendant 10-15 minutes) pour enlever les membrane et les organites. Après le mieux est de faire agir une DNase après avoir fait agir un dénaturant de protéines (SDS, beta-mercapto,...) qui enlèvera les protéines liées à l'ADN pour mieux le dégrader. Avec ce que tu récupère (ARN plus ou moins purs), tu peux ensuite faire un gel dénaturant puis hybrider une sonde spécifique de l'ARNm que tu veux purifier (Northern). Tu auras donc une seule bande si ta sonde est assez spécifique et que tu n'as pas perdu ton ARNm en cours de route (normalement non). Il te suffit de découper la bande et d'extraire ton ARNm du gel. Et voilà
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A+
Merci pour tes explications
