Bonjour , je souhaiterai savoir si des personnes ont l'habitude de réaliser leur clonage dans le pGEM-T de Promega ? car en suivant le protocole a la lettre ( ligation sur la nuit et ratio 3:1) et en piquant 18 clones par ligation je n ai aucun clone de bon ?
Est ce que d'habitude vous screener avec Xgal IPTG? car avec le témoin négatif j ai un bruid de fond relativement important est ce votre cas ?
MErci
bonjour mais je voudrai savoir est ce que vous réaliser des expériances sur cela càd clonage...
Voui, je fais des clonages.
En principe on utilise le pDrive de qiagen. C'est un plasmide qu'il est bien. La ligation sur une nuit me semble une bonne idée dans tous les cas.
Ensuite, sur le nombre de colonies à piquer, ca dépend des coups. Mais si tu fais une PCR avant de lancer les miniprep, tu gagnes du temps et tu peux piquer autant de clones que tu veux.
Cordialement,
piwi
BONJOUR,
j utilise souvent ce kit pgem qui fonctionne tres bien. Je screen avec xgal IPTG et ampicilline si tu as du bruit de fond verifie ton ampi.
Est ce que ton clonage a fonctionné avec l insert control?
a bientot
