Clonage AT

[invite13cf2a18]

Bonjour!
J'ai un compte rendu de TP à rendre et j'ai quelques doutes:
J'ai amplifié msrA par PCR puis j'ai utilisé pCR2.1 pour effectuer un clonage TA. Le rapport molaire (msrA / pCR2.1) est égale à 469. Je dois discuter de ces conditions dans mon rapport. Le fabricant Invitrogen® prétend qu'un rapport molaire de 1 permet une bonne efficacité, mais ne déconseille pas d'augmenter celui ci. Certains exo de mes TD conseil un rapport > 3 ... Que dois-je conclure? Les conditions de mon expérience sont-elles bonnes?
Merci!
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[invite71f23525]

Tu veux pas dire plutôt que ton rapport est de 4,69 et non pas 469, car si c'est le cas, alors ton rapport est vraiment trop grand!!!!

Greg

[invitec9f0f895]

salut
si c'est vraiment 469 (ce qui me parait bizarre) tu as vraiment mis beaucoup trop d'insert! et si c'est le cas, non tes conditions experimentales ne sont pas bonnes.

Yoyo

[invite13cf2a18]

Après amplification, on a fait migrer sur gel 10µL de mélange de PCR, et le prof nous a dit qu'il fallait considérer que l'on avait déposé 600ng d'insert. On utilise 2µL de ce même mélange de PCR pour la ligation avec 2µL pCR2.1 (3.125ng/µL) que l'on dilue préalablement 4 fois.

[A voir en vidéo sur Futura]