Isolat de protéines

[invite0b7db80c]

Bonjour

Je recherche des informations sur le(s) procédé(s) permettant d'extraire les protéines de soja ou de pois mais je ne trouve que des descriptions sommaires

Si quelqu'un a un lien ou des explications

Merci
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[LXR]

Bonjour,

Je ne pense pas que l'extraction de protéines varie tant que ça d'un matériau biologique à l'autre. Donc il suffit juste de faire un broyat de pois/soja. Tu broit dans un tampon avec si possible un inhibiteur de protéase. Tu récupère le surnageant, et puis ensuite l'extraction de protéines classique, avec un détergent doux de type Tween (80, 20). Tu précipites ensuite les protéines à l'éthanol à 95% mais le problème est que sa dénature. Ce qui peut être plus adapté est de faire passer le lysat sur une colonne DEAE-Dextran, et ajouter une étape de traitement RNase/DNase. Mais pour ce qui est de la purification, beaucoup de méthodes peuvent être possible, à chacun ses techniques de prédilection.

Greg

[Vinc]

Je ne pense pas que l'extraction de protéines varie tant que ça d'un matériau biologique à l'autre. Donc il suffit juste de faire un broyat de pois/soja.

Je n'y connais rien en plantes mais tu as quand même l paroie cellulosique... donc je ne sais pas si on peut utiliser exactement les même méthodes que pour les cellules animales et humaines.

Tu broit dans un tampon avec si possible un inhibiteur de protéase. Tu récupère le surnageant, et puis ensuite l'extraction de protéines classique, avec un détergent doux de type Tween (80, 20). Tu précipites ensuite les protéines à l'éthanol à 95% mais le problème est que sa dénature.

Moi ce que je ferai (et ce que je fais d'ailleurs ), c'est lyser les cellules tout simplement en utilisant un tampon dénaturant au contraire! Et ensuite, à partir de ce lysat je fais une extraction à l'éthanol mais ce sont deux choses différentes : tu as d'abord la lyse puis l'extraction.

Ce qui peut être plus adapté est de faire passer le lysat sur une colonne DEAE-Dextran, et ajouter une étape de traitement RNase/DNase. Mais pour ce qui est de la purification, beaucoup de méthodes peuvent être possible, à chacun ses techniques de prédilection.

Tout dépend ce que tu veux purifier! Si c'est des protéines taggées ca dépend du tag évidemment (His, etc....)!


Sinon ce que je te conseil si tu veux stocker tes protéines (parce que tu n'utilises pas tout ton lysat), c'est de lyser puis de faire un flash freeze derrière mais dans la minute qui suit (t'attend pas 3h)!

A+
Vinc

P.S : salut Greg

[LXR]

Oui c'est vrai que je n'avais pas pensé au problème des la paroi cellulosique. J'ai plutôt l'habitude des cellules animales...la force de l'habitude . Il me semble que des enzymes dégradent spécifiquement la cellulose, on en retrouve chez les herbivores. Mais peut-être existe-t-il des traitements chimiques? Je pense que Google doit très bien renseigner sur ça, surtout en anglais...

P.S : salut Greg

Non, sur le forum c'est LXR

Greg

[A voir en vidéo sur Futura]

[Yoyo]

Pour traiter les cellules vegetales il faut d'abord en faire des protoplastes apres on peu les travailer comme des cellules eucaryotes

YOyo

[Jean-Luc P]

Pour traiter les cellules vegetales il faut d'abord en faire des protoplastes apres on peu les travailer comme des cellules eucaryotes

YOyo

Je crois qu'il faut lire "comme des cellules animales" ;-p