anticorps monoclonaux anti CD3

[invite41a9bc42]

Bonjour à tous, j'ai un petit problème avec un exo que j'ai trouvé j'ai passé la journée d'hier à consulter les bouquins d'immunologie pour trouver une réponse mais j'ai pas pu:
Exercice:
Pour identifier des LT humain sur coupe de gonglions lymphatiques, on utilise des AC monoclonaux anti CD 3 couplé à un fluorochrome, ils sont mis en contact avec la coupe de gonglions.
1- citer ou schématiser les principales étapes de l'obtention de ces monoclonaux anti CD 3
2- l’observation au microscope à fluorescence montre une fluorescence des LT dans les gonglions mais aussi des cellules gonglionnaires, cellules dendritiques, monocytes et même des LB. à quoi est dû ce phénomène et comment y remédier

Bon pour la première question c'est simple: il faut purifier les CD 3, les injecter à une souris, récupérer les LB, les fusionner avec des cellules myélomateuses, obtention des hybridomes, isolement des AC monoclonaux.

Mais pour la deuxième question j'ai eu plusieurs idées mais je crois qu'aucune d'elles n'ai bonne, voila je crois que:
- soit ces anticorps ont été humanisés (donc par des souris transgénique) et c'est plutôt leur fragment FC qui a été se fixer sur les autres cellules et le FAB sur le CD3 des LT
- soit ce ne sont pas des anticorps monoclonaux et qu'ils s'agit d'une mauvaise purification de l'antigène (CD3)
- soit cet AC s'est fixé sur toutes les autres cellules parcequ'elles possèdent des antigènes qui partagent la structure des CD3, et je parle des 5 chaînes qui constitue les CD 3 et j'ai vu qu'on pouvais les trouver dans d'autres molécules antigéniques de surface.

Merci pour votre aide
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[invited0e8d08e]

Salut,

Sans avoir de réponse précise, je pense que tu peux abandonner la première hypothèse: aucun interet de s'embeter à humaniser des anticorps pour ce type de manip'. On humanise des anticorps pour les utiliser en thérapie humaine (cf: cétuximab, panitumumab qui sont des anti-EGFR1 utilisés en thérapie anti-cancer) mais là juste pour un marquage c'est inutile.

Les deux autres hypothèse sont possibles et relativement liées car même avec toute la volonté du monde on ne peut pas être sûr de la pureté de l'antigène produit. Ce qui veut dire qu'on ne peut pas être sur à 100% d'avoir un Ac monoclonal au final. Donc au bilan les réactions croisés de l'anticorps avec des molécule de structure épitopique proche sont possibles.

Voilà

[invite41a9bc42]

Merci pour la réponse (flyaway)... n'empêche que ça m'étonne un peu que personne ne s'intéresse à une question pareille.
Entre temps j'ai demander à un Professeur en Immunologie et il a dis que toutes hypothèse peut être prise en considération d'ailleurs c'est la ou toute la passion de la biologie réside...et donc l'hypothèse la plus probable si ça intéresse quelqu'un c'est plutôt la première et donc l'AC s'est fixé sur les récepteurs FC de toutes les cellules cités....
Et pour la question comment y remédier je vous laisse un peu de temps de réflexion ....c'est super simple je vous le garantie