Bonjour,
Dans quelques jours j'ai une présentation à faire sur les souris KO et donc je vais parler des techniques de mutation par insertion de fragments d'ADN exogènes dans un gène d'intérêt dans les cellules ES.
Pour le gene-targeting, ça va c'est pas compliqué à comprendre comment se fait l'insertion puisque c'est basé sur la recombinaison homologue. Par contre j'ai du mal à comprendre comment se fait l'insertion des cassettes de gene-trap, car la cassette en question n'est pas flanquée de régions homologues, donc l'insertion ne se fait sans doute pas par recombi homologue. Quand on utilise un vecteur rétroviral, je me doute très bien que pour l'insertion il n'y a pas besoin de régions homologues, car on se sert de la machinerie d'intégration du rétrovirus.
Mais quand on utilise un vecteur plasmidique, comment peut se faire l'intégration? Car pour les transfections stables classiques, on flanque notre séquence à insérer par des séquences homologues et le tour est joué, mais là, il n'y en a pas, et il ne peut pas y en avoir, donc....
Voilà mon problème est posé, j'espère que des biologistes moléculaires avisés me répondront...Et merci d'avance de vos réponses.
Greg
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