Bonjour
j'aurais voulu avoir quelques hypothèses à propos de ce problème de clonage:
je voudrais insérer mon insert dans un vecteur pcDNA. une digestion avec 2 enzymes de restriction EcoRI et XbaI a permis d'extraire mon insert contenu dans un vecteur de clonage pGEM et d'autre part de linéariser le pcDNA vide.
L'insert et le vecteur ayant des extrémités cohésives, il est possible après qu’elles se soient reconnues, de les lier l'une à l'autre par une réaction de ligation.
mais Le clonage n’a pas aboutit
j'ai réalisé un test de clivage par l’enzyme XbaI du pGEM/insert mais je constate que la digestion ne se fait pas.
sachant que ce n'est pas un problème d'enzyme et que le site de restriction est bien présent car vérifié par séquançage, quelles peuvent être les raisons de ce problème?
merci pour votre aide!!
sarra
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