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enzyme de restriction BsaHI



  1. #1
    elobiotech

    Exclamation enzyme de restriction BsaHI

    Bonjour à tous,

    Je voulais utiliser l'enzyme de restriction BsaHI.
    Y en a t-il parmis vous qui l'on déjà utilisé.

    J'ai essayé selon le protocole suivant :
    15 µl H20 stérile
    2 µl ADN 1µg
    2 µl tampon 10 X (tampon spécial pour l'enzyme)
    1 µl de l'enzyme

    Sans résultat.

    Je ne trouve pas de protocole pour cette enzyme.

    Merci d'avance

    -----


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  3. #2
    Elendilmir

    Re : enzyme de restriction BsaHI

    Bonjour (soir),

    J'ai une ou deux questions:
    - combien de temps as tu digéré? (une surdigestion de 10x est conseillée sur le catalogue)
    - as tu fait attention aux ilôts CpG et à la méthylation dcm dans ta séquence? (
    Je l'ai utilisée, et je n'ai pas eu de problèmes...

    El.
    Qui s'assied au fond d'un puits pour contempler le ciel le trouvera petit.

  4. #3
    Lord M

    Re : enzyme de restriction BsaHI

    Salut !

    - la température d'incubation était elle bien de 37°C ?
    - combien de temps as tu laissé incuber ?
    - as tu rajouté de la BSA (bovine serum albumin) dans ton mix, ou y'en a t'il déjà dans le mix ?
    - qu'essayes tu de digérer ? amplicons de PCR, génome entier (de quel organisme ?)
    Lord M

    What we do in life echoes in eternity

  5. #4
    elobiotech

    Re : enzyme de restriction BsaHI

    Rebonjour,

    J'avais pas précisé, j'ai fait ma réaction 1 h à 37°C. Mais je n'ai pas mis de BSA et il n'y en a pas dans le mix. C'est vraiment important la BSA ? ça fait quoi en faite ?

  6. #5
    Yoyo

    Re : enzyme de restriction BsaHI

    Salut

    sur le catalogue de NEB ils indiquent qu'une incubation a 60°C augmente de 2x l'activité de l'enzyme.
    http://www.neb.com/nebecomm/products/productR0556.asp

    En revanche il faut absolument que ta souche de coli soit dcm- sinon ton site de restriction est resistant a la coupure. Je pense que ton probleme de digestion viens de la.
    a lire si tu veux en savoir plus sur le systeme dam/dcm methylase.
    http://www.neb.com/nebecomm/tech_ref...s_of_ecoli.asp

    Yoyo

  7. A voir en vidéo sur Futura

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